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基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）已成为生命科学领域广泛使用的分析工具。在真菌MALDI-TOF-MS蛋白质谱分析中，从复杂基质中蛋白质的提取、双向电泳，到MALDI-TOF-MS分析，每个步骤不同技术的选择是实验成功与否的关键。本文对真菌蛋白质谱分析研究中的关键技术进行综述，为国内开展真菌蛋白质组学研究提供思路。