【摘 要】
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目的 确定鞭毛马达蛋白(flagellar motor protein)MotA编码基因在空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)致病性相关趋化和定植中的作用.方法 采用PCR扩增motA基因以及用于motA基因敲除的Kan~r基因和plus-motA基因片段,目的扩增产物克隆后测序.根据同源重组原理,构建空肠弯曲菌NCTC11168株motA基因自杀质粒(pBlueskrit-Ⅱ-
【机 构】
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312000,绍兴文理学院医学院,浙江医学高等专科学校基础医学部,310058,杭州,浙江大学医学院病原生物学系,310058,杭州,浙江大学医学院病原生物学系
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目的 确定鞭毛马达蛋白(flagellar motor protein)MotA编码基因在空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)致病性相关趋化和定植中的作用.方法 采用PCR扩增motA基因以及用于motA基因敲除的Kan~r基因和plus-motA基因片段,目的扩增产物克隆后测序.根据同源重组原理,构建空肠弯曲菌NCTC11168株motA基因自杀质粒(pBlueskrit-Ⅱ-SK~(motA-kan))和motA基因敲除突变株(motA~-).采用半固体平板迁移试验、基于硬琼脂平板(hard agar plus,HAP)的脱氧胆酸钠(SDC)体外趋化试验、小鼠空肠定植试验,了解空肠弯曲菌motA~-突变株和野生株鞭毛动力、SDC趋化和BALB/c-ByJ小鼠空肠内定植能力差异性.结果 所克隆的空肠弯曲菌motA基因核苷酸和氨基酸序列与已报道的相应序列相似性为100%.PCR和测序及含抗生素培养基连续传代培养结果证实,自杀质粒和motA~-突变株构建成功.motA~-突变株在半固体琼脂平板上的菌斑直径、在HAP上对0.2moL/L SDC趋化聚集环直径、黏附于小鼠空肠黏膜表面以及空肠内容物中motA~-突变株数量均明显少于野生株(P<0.05).结论 本研究成功构建了空肠弯曲菌motA基因敲除突变株.motA基因是空肠弯曲菌鞭毛动力以及致病性相关趋化和定植的必需基因。
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