【摘 要】
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背景:如何应用中药干预肠黏膜屏障损伤后的自噬失衡状态,从而最终干预胃肠道急性移植物抗宿主病的发生是造血干细胞移植后亟需解决的问题.目的:探讨黄芩汤干预急性肠道移植物抗宿主病的具体机制.方法:CB6F1小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、黄芩汤低剂量组、黄芩汤中剂量组、黄芩汤高剂量组,每组16只.模型对照组及黄芩汤低、中、高剂量组小鼠在60Co全身照射后4 h内(照射总剂量8 Gy),经尾静脉输注Balb/c H-2d小鼠单个核细胞悬液(骨髓细胞8×107/只+脾细胞8×107/只).造模后当天开始分别给予
【机 构】
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山东中医药大学附属医院血液科,山东省济南市 250000;山东中医药大学中医学(八年制),山东省济南市 250000
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背景:如何应用中药干预肠黏膜屏障损伤后的自噬失衡状态,从而最终干预胃肠道急性移植物抗宿主病的发生是造血干细胞移植后亟需解决的问题.目的:探讨黄芩汤干预急性肠道移植物抗宿主病的具体机制.方法:CB6F1小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、黄芩汤低剂量组、黄芩汤中剂量组、黄芩汤高剂量组,每组16只.模型对照组及黄芩汤低、中、高剂量组小鼠在60Co全身照射后4 h内(照射总剂量8 Gy),经尾静脉输注Balb/c H-2d小鼠单个核细胞悬液(骨髓细胞8×107/只+脾细胞8×107/只).造模后当天开始分别给予不同浓度黄芩汤灌胃,模型组及正常对照组灌胃等容量的生理盐水,连续应用15 d.最后一次灌胃后8 h取材,每组取6只小鼠小肠组织,采用PCR和Western blot检测LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1、P62表达水平,苏木精-伊红染色进行小肠黏膜病理分级评分,透射电镜观察小肠黏膜上皮细胞自噬泡结构;每组剩余10只(除正常对照组)小鼠进行临床急性移植物抗宿主病分级并记录生存时间.结果 与结论:①应用黄芩汤后,小鼠存活时间显著延长,临床急性移植物抗宿主病评分显著降低,小肠黏膜病理分级评分显著下降,黄芩汤中、高剂量组评分较模型对照组下降最显著,且黄芩汤中、高剂量组之间无显著差异;②模型对照组小鼠小肠组织自噬相关指标LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin 1水平显著低于正常对照组(P<0.01),P62水平显著高于正常对照组(P<0.01),黄芩汤可以促进LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1水平的恢复并下调P62水平(P<0.01);③透射电镜观察黄芩汤治疗组的自噬泡明显比模型对照组增多,且伴有如线粒体等重要细胞器形态的恢复;④结果表明,黄芩汤通过干预自噬相关蛋白,促进肠道急性移植物抗宿主病自噬稳态的恢复,保护肠黏膜屏障从而减轻了移植后肠道的排异,有望成为治疗急性移植物抗宿主病的新方法.
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