【摘 要】
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欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹(Glechoma hederacea)叶片中的一种糖基化植物新蛋白.如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测Gleheda的过程中通常受到一些
【机 构】
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清华大学深圳研究生院生命学部,韶关学院英东生物工程学院生物工程系,Department of Molecular Biotechnology
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欧亚活血丹外源凝集素(Gleheda)是分离自欧亚活血丹(Glechoma hederacea)叶片中的一种糖基化植物新蛋白.如同其他糖基化蛋白,通过免疫学方法探测Gleheda的过程中通常受到一些不相干糖蛋白的妨碍,为此制定了抗Gleheda特异性多克隆抗体的纯化方案.免疫血清蛋白经硫酸铵选择性沉淀后,分别以Gleheda和刺槐外源凝集蛋白(RPA)结合在Sepharose 4B作为亲和配体,采用亲和层析法连续纯化2次,然后进一步采用离子交换层析Q Fast Flow提纯.经每一步骤提纯得到的抗体组分对Gleheda的特异性,均同时采用双向免疫扩散检验和Western blot分析.结果表明,以Gleheda为配体,亲和纯化制备得到的抗体组分对叶片粗提物中的许多植物(糖)蛋白仍然表现交叉反应.为除去由植物糖蛋白中的聚糖所引起这些非特异性交叉反应抗体,接着以RPA为配体再次进行亲和纯化,Western blot分析显示,抗体的特异性得到提高但并非除去了所有非特异性交叉反应的抗体.最后进一步采用离子交换层析制备得到仅抗Gleheda蛋白的特异性抗体组分,此抗体组分适用于免疫探测研究.该抗体纯化制备程序简易而高效,而且不需要昂贵的设备.
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