【摘 要】
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根据多种已发表的淀粉粒结合淀粉合成酶 (GBSS)基因序列的对比分析 ,以它们保守区的核酸顺序为基础 ,设计一对简并引物。从膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus (Fisch .)Bunge
【机 构】
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上海中医药研究院中药研究所!上海200032; 中国科学院上海植物生理研究所植物分子遗传国家重点实验室!上海200032;
【基金项目】
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国家“九五”攻关资助项目!( 96_C0 2_0 3_0 6);国家自然科学基金资助项目!( 3 9670 877);国家中医药管理局资助项目!( 95B0 2 5 );
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根据多种已发表的淀粉粒结合淀粉合成酶 (GBSS)基因序列的对比分析 ,以它们保守区的核酸顺序为基础 ,设计一对简并引物。从膜荚黄芪 (Astragalusmembranaceus (Fisch .)Bunge)毛状根提取mRNA ,用RT_PCR的方法扩增出 5 6 0bp的cDNA片段。序列测定表明 ,此片段与发表的豌豆和马铃薯GBSSI基因相应序列同源性分别达 89.6 %和 73.0 %。通过 5′/ 3′RACE(rapidamplificationofcDNAends)的方法 ,分别扩增出 5′和 3′端序列 ,从而获得全长的cDNA。序列分析表明此cDNA编码黄芪的GBSSI。根据推导的蛋白质序列 ,这是一个由 6 0 7个氨基酸组成的、pI为7.5 5、相对分子量为 6 6 5 6 0的前体蛋白。根据同类GBSS的氨基酸的序列比较 ,其氨基端转运肽同源性较低 ,而成熟蛋白氨基酸序列同源性较高。结合已知GBSSI的转运肽切割位点和 11种植物氨基端对准分析的结果 ,确立了此类GBSS的转运肽切割位点识别模式。对黄芪GBSSI转运肽切割位点进行了预测 ,它含有 77个氨基酸的转运肽 ,成熟蛋白pI为 5 .78,相对分子量为 5 82 70。Northernblot分析表明 ,GBSS基因在黄芪毛状根和正常根中的表达高于茎和叶
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