目的 探讨X射线照射联合RNA干扰STA33基因对人食管癌细胞放射敏感性的影响.方法 针对STA33 mRNA序列,设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板寡核苷酸链(siRNA1、siRNA2和siRNA3),构建STA33-siRNA阳性和阴性重组质粒.用以转染Eca-109细胞.Eca-109细胞分为5组:转染试剂对照组、阴性质粒对照组、重组质粒siRNA1实验组、siRNA2实验组和siRNA3实验组.细胞转染后48 h.换用G418培养液筛选21 d,获得单个阳性克隆并扩增.分别用RT-PCR和Western blotting检测细胞中的STAT3 mRNA和蛋白表达.转染细胞分别接受0、2、4、6和8 Gy X射线照射,平板克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞仪检测经4 Gy X射线照射的细胞周期和凋亡.结果 成功构建了STAT3-siRNA3重组质粒.RT-PCR和Western blotting显示,siRNA3实验组的STA33 mRNA和蛋白表达显著少于2个对照组,而siRNA1和siRNA2实验组的STA33 mRNA和蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义.在2～8 Gy剂量点,siRNA3实验组细胞存活分数均显著低于对照组(t=-0.228～-0.051,P<0.05).流式细胞仪分析显示,经4 Gy X射线照射,siRNA3实验组G0/G1,期细胞的百分率和细胞凋亡率均显著高于转染试剂对照组、阴性质粒对照组(t=-13.137～16.350,P<0.01),4 Gy X射线照射可引起细胞周期G0/G1期阻滞,诱导肿瘤细胞凋亡.结论 STAT3-siRNA3能有效地抑制肿瘤细胞的STA33 mRNA和蛋白表达.4 Gy X射线照射联合STA33-siRNA3可抑制人食管癌细胞增殖.引起细胞周期阻滞和凋亡,提高肿瘤细胞的放射敏感性。
X射线照射联合RNA干扰STAT3基因对人食管癌细胞放射敏感性的影响
【摘 要】
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目的 探讨X射线照射联合RNA干扰STA33基因对人食管癌细胞放射敏感性的影响.方法 针对STA33 mRNA序列,设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板寡核苷酸链(siRNA1、siRNA2和siRNA3),构建STA33-siRNA阳性和阴性重组质粒.用以转染Eca-109细胞.Eca-109细胞分为5组:转染试剂对照组、阴性质粒对照组、重组质粒siRNA1实验组、siRNA2
【机 构】
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210006,南京医科大学附属南京第一医院肿瘤科,天津医科大学,210006,南京医科大学附属南京第一医院肿瘤科
【出 处】
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中华放射医学与防护杂志
【发表日期】
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2011年31期
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