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[摘要] 目的 克隆并构建淋病奈瑟菌表面蛋白A(nspA)基因原核表达系统,并对重组产物rNspA进行免疫原性鉴定。 方法 采用PCR扩增nspA基因,构建nspA基因原核表达系统。SDS-PAGE检测目的重组蛋白rNspA表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rNspA,免疫双扩散试验及Western Blot鉴定rNspA的免疫原性。 结果 克隆的nspA基因与GenBank中相关序列相似性为100%,rNspA表达量为细菌总蛋白的40.1%,提纯的rNspA在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。rNspA抗血清免疫双扩散效价为1∶4,rNspA抗血清能有效识别rNspA。 结论 所构建的nspA基因原核表达系统能高效表达rNspA,表达的产物有良好的免疫原性,为淋病奈瑟菌免疫疫苗的研制奠定基础。
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1.4 nspA基因原核表达系统的构建
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