【摘 要】
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[目的]研究可溶性吡啶核苷酸转氢酶基因(UdhA)和醛糖还原酶基因(xylI)共表达对木糖醇发酵的影响.[方法]将来源于博伊丁假丝酵母醛糖还原酶xylI基因克隆到pET28a(+)上,并在BL21 (DE3)中表达,通过SDS-PAGE对表达产物的分子量和酶活进行测定.随即将xylI基因连接lacP启动子,构建pWYZ-2质粒并将其转化到E.coli AI07菌株.进一步将来源于E.coli W3110的UdhA基因克隆到pWYZ-2质粒实现与xylI共表达,所构建pWYZ-4质粒转化到E.coli AI
【机 构】
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湖北工业大学工业微生物教育部重点实验室,湖北武汉430068
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[目的]研究可溶性吡啶核苷酸转氢酶基因(UdhA)和醛糖还原酶基因(xylI)共表达对木糖醇发酵的影响.[方法]将来源于博伊丁假丝酵母醛糖还原酶xylI基因克隆到pET28a(+)上,并在BL21 (DE3)中表达,通过SDS-PAGE对表达产物的分子量和酶活进行测定.随即将xylI基因连接lacP启动子,构建pWYZ-2质粒并将其转化到E.coli AI07菌株.进一步将来源于E.coli W3110的UdhA基因克隆到pWYZ-2质粒实现与xylI共表达,所构建pWYZ-4质粒转化到E.coli AI07菌株,比较了E.coli AI07/pWYZ-2和E.coli AI07/pW-YZ-4木糖醇发酵结果.[结果]在BL21 (DE3)/pET28a(+)体系诱导表达的醛糖还原酶分子量为39 kD,木糖还原酶酶活为3.30 U/mL.E.coli AI07/pWYZ-2菌株发酵48h,木糖醇产量为19.90 g/L;E.coli AI07/pWYZ-4发酵36 h,木糖醇产量达到19.91 g/L,较菌株AI07/pWYZ-2生产强度提高了33.25％.[结论]通过将UdhA基因与xylI基因进行共表达,提高了重组大肠杆菌(E.coli AI07/pWYZ-4)合成木糖醇的生产强度.
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