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摘要 [目的] 克隆东亚砂藓甘油醛3磷酸脱氢酶基因RjGAPDH，并对其进行生物信息学和表达分析。[方法] 通过分析东亚砂藓转录组测序数据，利用RTPCR技术克隆该基因的全长序列，并通过荧光定量PCR分析RjGAPDH基因在不同干旱胁迫时间的表达情况。[结果] 该基因全长为1 208 bp，开放阅读框1 053 bp，编码350个氨基酸，预测蛋白分子量为38.66 kD，等电点 pI 为 6.02，不稳定系数为23.97，为稳定蛋白；该基因编码的蛋白无跨膜区和信号肽序列，定位于细胞质。在快速干旱胁迫处理过程中，东亚砂藓RjGAPDH基因的表达量高于正常生长的材料（CK），能被诱导表达。[结论] RjGAPDH基因可能参与东亚砂藓对干旱的胁迫反应，为后续进一步研究其功能特征奠定基础。
关键词 东亚砂藓；RjGAPDH；基因克隆；表达分析
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08506-05
Abstract [Objective] The research aimed to clone glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase gene RjGAPDH， and analyze its bioinformation and expression. [Method] Based on RNASeq databases of Racomitrium japonicum， RjGAPDH gene was cloned by RTPCR， and the expression of RjGAPDH in different times under quick dry was detected by realtime PCR. [Result] The full length cDNA sequence of RjGAPDH gene was 1 208 bp in length， and contained a 1 053 bp open reading frame which encoded a protein of 350 amino acids， molecular weight was 38.66 kD and theoretical pI was 6.02. The predicted RjGAPDH protein belonged to stable protein， located in cytoplasm without transmembrane protein and signal peptide. In the proceed of quick dry， RjGAPDH gene could be induced， and the expression level was higher than that in CK. [Conclusion] RjGAPDH gene was speculated to participate the stress reaction of Racomitrum japonium， and the results laid the foundations for the further study on its function.
Key words Racomitrium japonicum； RjGAPDH； Gene clone； Expression analysis
甘油醛3磷酸脱氢酶（glyceraldehyde3phosphate dehydrogenas，GAPDH）是糖酵解、糖异生和卡尔文循环途径中的关键酶[1]，参与糖酵解过程中第一个 ATP 的形成，是维持生命活动能量形成的基本酶类之一[2-3]。GAPDH存在于所有生物中，高度保守，且在细胞中含量丰富，占总蛋白的10%～20%[4]。由于GAPDH在生物体不同组织和细胞中高丰度表达且非常稳定，因此，一直以来被人们当作“管家”基因，用作研究目标基因相对表达的内参对照[5]。但随着研究的深入发现，当外界环境发生改变时（如无氧胁迫，伤害，高温，高盐碱和干旱），GAPDH在mRNA和蛋白质水平上也会随之发生改变，并大量积累表达[6-7]，表明其与抗逆代谢有一定的关联，且可以定位于除细胞质之外的质膜、细胞核、多聚体、内质网与高尔基体上，功能呈现多样性[8-9]。目前，已从许多植物中克隆得到GAPDH基因，并对其开展参与逆境胁迫的分子响应机制研究[3，6，10-16]，发现其在增强植物抗旱性方面具有一定的功能[17-18]。
东亚砂藓（Racomitrium japonicum）隶属于紫萼藓科（Grimmiaceae）砂藓属（Racomitrium），生于低海拔地区的岩面、岩面薄土和砂地面上，有时见于石壁上或近树基部地上，在我国南北多省区广泛分布[19]。东亚砂藓在干燥状态下呈休眠状态，复水后可短时间内恢复生活力，是典型的耐旱藓类，但有关与其抗旱性相关的分子生物学研究很少。笔者对东亚砂藓转录组测序数据进行分析，发现1条与GAPDH基因同源性较高的基因序列，以此设计引物，克隆获得该基因的全长序列，并对其生物信息学和快速干旱胁迫下的表达情况进行了分析，为深入研究GAPDH基因的抗旱功能提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
东亚砂藓采于黑龙江省五大连池风景区。材料采回后进行组织培养试验，以获得的无菌组培苗作为后续试验材料。
选取生长旺盛、高约1.5 cm的无菌组培苗植株，用镊子快速将附着根部的培养基去除，放入平皿中，分2部分处理。一部分直接用液氮速冻，放入-80 ℃冰箱保存，用于RjGAPDH基因的克隆。另一部分用硅胶进行快速干旱处理，处理时间为10、20、30和60 min，同时以未经处理的材料作为对照（CK），液氮速冻后于-80 ℃冰箱保存，用于RjGAPDH基因的表达验证分析。 RNAse抑制剂、DNaseⅠ购自Promega公司；Oligo（dT）15、dNTP和MMLV反转录酶购自Invitrogen公司；pMD 18T载体、DNA Marker购自Takara公司；Sso Fast TM Evagreen Supermix购自BioRad公司；大肠杆菌E.coli DH5α由齐齐哈尔大学遗传学实验室保存；其他生化试剂均购自上海生工生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成；荧光定量表达分析于BioRad公司的CFX96仪器上进行。
1.2 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
参照宋晓宏等[20]和沙伟等[21]方法提取上述样品的总RNA，用NanoDrop 2000微量紫外分光光度计测定样品的浓度和OD260/OD280，并用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。为防止总RNA中残留的基因组DNA干扰后续试验，利用Promega公司的DNase I对总RNA进行纯化。以总RNA为模板，以Oligo（dT）15为反转录引物，用MMLV反转录酶合成cDNA第一链，具体方法参照MMLV试剂盒说明书进行。
3 讨论
甘油醛3磷酸脱氢酶在高等植物中以2种形式存在，一种是由GAPA和GAPB 2个亚基组成的存在于叶绿体中的GAPDH，主要参与卡尔文循环；一种是由4个同种亚基GAPC组成的存在于细胞质中的GAPDH，主要参与糖酵解和糖异生过程。GAPA和GAPB的同源性较高，可达80%，而GAPC与两者的同源性较低，小于45%[22]。该研究通过RTPCR法从东亚砂藓中克隆得到含完整编码序列的RjGAPDH基因全长序列，对其生物信息学和同源序列分析发现，该基因编码的氨基酸序列具有Gp_dh_N和Gp_dh_C 2个保守区，符合GAPC亚基的结构特征，且亚细胞定位于细胞质，与马铃薯和毛果杨等植物细胞质中GAPDH基因氨基酸序列的同源性较高，因此认为该基因为位于细胞质中的GAPDH基因。
在逆境胁迫下，GAPDH可参与多种有异于糖酵解和糖异生过程中的生理生化途径，能抵御逆境胁迫对植物造成的伤害[23]。目前，有关植物GAPDH基因应答逆境胁迫的报道较多。BAEK等[24]将GAPDH基因转化到拟南芥原生质体中发现，该基因能强烈抑制热胁迫时H2O2的产生和细胞的死亡。于丽丽等[14]研究发现，刚毛柽柳（Tamari hispid）在受到PEG、NaCl、CdCl2和NaHCO3胁迫时，ThGAPDH基因的表达量发生明显变化，具有对胁迫的应答能力。张旸等[3]克隆得到星星草PtGAPDH基因，Northern杂交分析显示，随着Na2CO3溶液浓度的增加，PtGAPDH基因在盐碱胁迫下叶片和根部表达量都显著升高；超过最大耐受量后，PtGAPDH基因表达丰度逐渐降低。ZIAF等[25]发现，在干旱等各种胁迫下，野生型番茄（Solanum pennellii）的ADH和GAPDH基因能被诱导表达，而植物膜脂过氧化的程度则随之减轻。MEREWITZ等[26]在研究含有衰老响应启动子SAG12和IPT基因的转基因植物匍匐翦股颖（Agrostis stolonifera）时发现，耐旱植物的叶在水分胁迫下衰老更慢，而在水分亏缺时，该植物的GAPDH 蛋白含量较高，增加了植物的抗性。齐晓花等[15]以黄瓜（Cucumis sativus）耐涝品系“早二N”为材料，研究3–磷酸甘油醛脱氢酶基因CsGAPDH时得出，CsGAPDH属于黄瓜涝胁迫响应基因，在缓解涝胁迫伤害过程中可能具有重要的调控作用。该研究中，当东亚砂藓受到干旱胁迫时，RjGAPDH基因明显诱导表达，说明干旱胁迫可使糖酵解途径增强，糖代谢能力明显加强，有一定的抗胁迫功能，推测该基因可能参与了东亚砂藓的抗逆调控并发挥作用。
为明确RjGAPDH基因的功能，正在进行遗传转化模式植物的研究，为进一步研究东亚砂藓的抗旱机制提供参考。
参考文献
[1] 王镜岩，朱圣庚，徐长法.生物化学[M].北京：高等教育出版社，2006：607-610.
[2] DANSHINA P V，SCHMALHAUSEN E V，AVETISYAN A V，et al.Mildly oxidized glyceraldehydes3phosphate dehydrogenase as a possible regulator of glycolysis [J].IUBMB Life，2001，51：309-314.
[3] 张旸，郭海俊，刘龙飚，等.星星草PtGAPDH基因的克隆与表达分析[J].草业学报，2014，23（2）：207-214.
[4] BIESECKER G，HARRIS J I，THIERRY J C，et al.Sequence and structure of Dglyceraldehyde 3phosphate dehydrogenase from Bacillus stearothermophilus [J].Nature，1977，266：328-333.
[5] 卢倩，弭晓菊，崔继哲.植物甘油醛3磷酸脱氢酶作用机制的研究进展[J].生物技术通报，2013（8）：1-6.
[6] YANG Y，KWON H B，PENG H P，et al.Stress responses and metabolic regulation of glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase genes in Arabidopsis[J].Plant Physiology，1993，101（1）：209-216.
[7] BARBER R D，HARMER D W，COLEMAN R A，et al.GAPDH as a housekeeping gene：analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues [J].Physiological Genomics，2005，21：389-395. [8] 张霞，王艳，张富春.逆境胁迫下甘油醛3磷酸脱氢酶功能多元化的研究进展[J].植物生理学报，2013，49（1）：24-28.
[9] SIROVER M A.Subcellular dynamics of multifunctional protein regulation：mechanisms of GAPDH intracellular translocation [J].Journal of Cellular Biochemistry，2012，113（7）：2193-2200.
[10] JOU Y，CHOU P H，HE M，et al.Tissuespecific expression and functional complementation of a yeast potassiumuptake mutant by asaltinduced ice plant gene mcSKD1[J].Plant Molecular Biology，2004，54（6）：881-893.
[11] YANG J，YEN H E.Early salt stress effects on the changes in chemical composition in leaves of ice plant and Arabidopsis.A Fourier transform infrared spectroscopy study [J].Plant Physiology，2002，130（2）：1032-1042.
[12] HANSCH R，MENDEL R R，CERFF R，et al.Lightdependent anaerobic induction of the maize glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase 4（GapC4）promoter in Arabidopsis thaliana and Nicotiana tabacum[J].Annals of Botany，2003，91：149-154.
[13] 李晓泽，刘关君，杨传平.西伯利亚蓼甘油醛3磷酸脱氢酶基因的cDNA克隆与序列分析[J].植物生理学通讯，2007，43（1）：41-48.
[14] 于丽丽，高彩球，王玉成，等.柽柳甘油醛3磷酸脱氢酶基因的克隆与表达分析 [J].东北林业大学学报，2010，38（7）：105-108.
[15] 齐晓花，许学文，罗晶晶，等.黄瓜3磷酸甘油醛脱氢酶基因CsGAPDH的克隆及其涝胁迫响应分析[J].园艺学报，2011，38（9）：1693-1698.
[16] LI R，SHEN Y.An old method facing a new challenge：Revisiting housekeeping proteins as internal reference control for neuroscience research [J].Life Sciences， 2013，92（13）：747-751.
[17] SANCHEZ B P，EGEA I，SANCHEZ B T.Understanding the mechanisms of chilling injury in bell pepper fruits using the proteomic approach [J].Journal of Proteomics，2012，75（17）：5463-5478.
[18] LIIV I，HALJASORG U，KISAND K.AIREinduced apoptosis is associated with nuclear translocation of stress sensor protein GAPDH [J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2012，423（1）：32-37.
[19] 黎兴江.中国苔藓志 第三卷 [M].北京：科学出版社，2000：54-57.
[20] 宋晓宏，沙伟，林琳，等.毛尖紫萼藓干旱胁迫cDNA文库的构建[J].植物研究，2010，30（6）：713-717.
[21] 沙伟，张梅娟，刘博，等.毛尖紫萼藓抗旱相关基因GpLEA的克隆与表达分析[J].西北植物学报，2013，33（9）：1724-1730.
[22] 杨洋，张智俊，罗淑萍.毛竹甘油醛3磷酸脱氢酶基因的克隆与序列分析 [J].经济林研究，2010，28（3）：7-13.
[23] 梁颖，李玉花.植物中磷酸甘油醛3磷酸脱氢酶（GAPDH）在氧化胁迫下的生理功能[J].植物生理学通讯，2009，45（10）：1027-1032.
[24] BAEK D，JINA Y，JEONG J C，et al.Suppression of reactive oxygen species by glycerald ehyde3phosphate dehydrogenase[J].Phytochemistry，2008，69（2）：333-338.
[25] ZIAF K，LOUKEHAICH R，GONG P J，et al.A Multiple stressresponsive gene ERD15 from Solanum pennellii confers stress tolerance in tobacco [J].Plant and Cell Physiology，2011，52（5）：1055-1067.
[26] MEREWITZ E B，GIANFAGNA T，HUANG B R.Protein accumulation in leaves and roots associated with improved drought tolerance in creeping bentgrass expressing an ipt gene for cytokinin synthesis [J].Journal of Experimental Botany，2010，62（5）：5311-5333.
关键词 东亚砂藓；RjGAPDH；基因克隆；表达分析
中图分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08506-05
Abstract [Objective] The research aimed to clone glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase gene RjGAPDH， and analyze its bioinformation and expression. [Method] Based on RNASeq databases of Racomitrium japonicum， RjGAPDH gene was cloned by RTPCR， and the expression of RjGAPDH in different times under quick dry was detected by realtime PCR. [Result] The full length cDNA sequence of RjGAPDH gene was 1 208 bp in length， and contained a 1 053 bp open reading frame which encoded a protein of 350 amino acids， molecular weight was 38.66 kD and theoretical pI was 6.02. The predicted RjGAPDH protein belonged to stable protein， located in cytoplasm without transmembrane protein and signal peptide. In the proceed of quick dry， RjGAPDH gene could be induced， and the expression level was higher than that in CK. [Conclusion] RjGAPDH gene was speculated to participate the stress reaction of Racomitrum japonium， and the results laid the foundations for the further study on its function.
Key words Racomitrium japonicum； RjGAPDH； Gene clone； Expression analysis
甘油醛3磷酸脱氢酶（glyceraldehyde3phosphate dehydrogenas，GAPDH）是糖酵解、糖异生和卡尔文循环途径中的关键酶[1]，参与糖酵解过程中第一个 ATP 的形成，是维持生命活动能量形成的基本酶类之一[2-3]。GAPDH存在于所有生物中，高度保守，且在细胞中含量丰富，占总蛋白的10%～20%[4]。由于GAPDH在生物体不同组织和细胞中高丰度表达且非常稳定，因此，一直以来被人们当作“管家”基因，用作研究目标基因相对表达的内参对照[5]。但随着研究的深入发现，当外界环境发生改变时（如无氧胁迫，伤害，高温，高盐碱和干旱），GAPDH在mRNA和蛋白质水平上也会随之发生改变，并大量积累表达[6-7]，表明其与抗逆代谢有一定的关联，且可以定位于除细胞质之外的质膜、细胞核、多聚体、内质网与高尔基体上，功能呈现多样性[8-9]。目前，已从许多植物中克隆得到GAPDH基因，并对其开展参与逆境胁迫的分子响应机制研究[3，6，10-16]，发现其在增强植物抗旱性方面具有一定的功能[17-18]。
东亚砂藓（Racomitrium japonicum）隶属于紫萼藓科（Grimmiaceae）砂藓属（Racomitrium），生于低海拔地区的岩面、岩面薄土和砂地面上，有时见于石壁上或近树基部地上，在我国南北多省区广泛分布[19]。东亚砂藓在干燥状态下呈休眠状态，复水后可短时间内恢复生活力，是典型的耐旱藓类，但有关与其抗旱性相关的分子生物学研究很少。笔者对东亚砂藓转录组测序数据进行分析，发现1条与GAPDH基因同源性较高的基因序列，以此设计引物，克隆获得该基因的全长序列，并对其生物信息学和快速干旱胁迫下的表达情况进行了分析，为深入研究GAPDH基因的抗旱功能提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
东亚砂藓采于黑龙江省五大连池风景区。材料采回后进行组织培养试验，以获得的无菌组培苗作为后续试验材料。
选取生长旺盛、高约1.5 cm的无菌组培苗植株，用镊子快速将附着根部的培养基去除，放入平皿中，分2部分处理。一部分直接用液氮速冻，放入-80 ℃冰箱保存，用于RjGAPDH基因的克隆。另一部分用硅胶进行快速干旱处理，处理时间为10、20、30和60 min，同时以未经处理的材料作为对照（CK），液氮速冻后于-80 ℃冰箱保存，用于RjGAPDH基因的表达验证分析。 RNAse抑制剂、DNaseⅠ购自Promega公司；Oligo（dT）15、dNTP和MMLV反转录酶购自Invitrogen公司；pMD 18T载体、DNA Marker购自Takara公司；Sso Fast TM Evagreen Supermix购自BioRad公司；大肠杆菌E.coli DH5α由齐齐哈尔大学遗传学实验室保存；其他生化试剂均购自上海生工生物工程有限公司；引物由上海生工生物工程有限公司合成；荧光定量表达分析于BioRad公司的CFX96仪器上进行。
1.2 总RNA的提取及cDNA第一链的合成
参照宋晓宏等[20]和沙伟等[21]方法提取上述样品的总RNA，用NanoDrop 2000微量紫外分光光度计测定样品的浓度和OD260/OD280，并用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性。为防止总RNA中残留的基因组DNA干扰后续试验，利用Promega公司的DNase I对总RNA进行纯化。以总RNA为模板，以Oligo（dT）15为反转录引物，用MMLV反转录酶合成cDNA第一链，具体方法参照MMLV试剂盒说明书进行。
3 讨论
甘油醛3磷酸脱氢酶在高等植物中以2种形式存在，一种是由GAPA和GAPB 2个亚基组成的存在于叶绿体中的GAPDH，主要参与卡尔文循环；一种是由4个同种亚基GAPC组成的存在于细胞质中的GAPDH，主要参与糖酵解和糖异生过程。GAPA和GAPB的同源性较高，可达80%，而GAPC与两者的同源性较低，小于45%[22]。该研究通过RTPCR法从东亚砂藓中克隆得到含完整编码序列的RjGAPDH基因全长序列，对其生物信息学和同源序列分析发现，该基因编码的氨基酸序列具有Gp_dh_N和Gp_dh_C 2个保守区，符合GAPC亚基的结构特征，且亚细胞定位于细胞质，与马铃薯和毛果杨等植物细胞质中GAPDH基因氨基酸序列的同源性较高，因此认为该基因为位于细胞质中的GAPDH基因。
在逆境胁迫下，GAPDH可参与多种有异于糖酵解和糖异生过程中的生理生化途径，能抵御逆境胁迫对植物造成的伤害[23]。目前，有关植物GAPDH基因应答逆境胁迫的报道较多。BAEK等[24]将GAPDH基因转化到拟南芥原生质体中发现，该基因能强烈抑制热胁迫时H2O2的产生和细胞的死亡。于丽丽等[14]研究发现，刚毛柽柳（Tamari hispid）在受到PEG、NaCl、CdCl2和NaHCO3胁迫时，ThGAPDH基因的表达量发生明显变化，具有对胁迫的应答能力。张旸等[3]克隆得到星星草PtGAPDH基因，Northern杂交分析显示，随着Na2CO3溶液浓度的增加，PtGAPDH基因在盐碱胁迫下叶片和根部表达量都显著升高；超过最大耐受量后，PtGAPDH基因表达丰度逐渐降低。ZIAF等[25]发现，在干旱等各种胁迫下，野生型番茄（Solanum pennellii）的ADH和GAPDH基因能被诱导表达，而植物膜脂过氧化的程度则随之减轻。MEREWITZ等[26]在研究含有衰老响应启动子SAG12和IPT基因的转基因植物匍匐翦股颖（Agrostis stolonifera）时发现，耐旱植物的叶在水分胁迫下衰老更慢，而在水分亏缺时，该植物的GAPDH 蛋白含量较高，增加了植物的抗性。齐晓花等[15]以黄瓜（Cucumis sativus）耐涝品系“早二N”为材料，研究3–磷酸甘油醛脱氢酶基因CsGAPDH时得出，CsGAPDH属于黄瓜涝胁迫响应基因，在缓解涝胁迫伤害过程中可能具有重要的调控作用。该研究中，当东亚砂藓受到干旱胁迫时，RjGAPDH基因明显诱导表达，说明干旱胁迫可使糖酵解途径增强，糖代谢能力明显加强，有一定的抗胁迫功能，推测该基因可能参与了东亚砂藓的抗逆调控并发挥作用。
为明确RjGAPDH基因的功能，正在进行遗传转化模式植物的研究，为进一步研究东亚砂藓的抗旱机制提供参考。
参考文献
[1] 王镜岩，朱圣庚，徐长法.生物化学[M].北京：高等教育出版社，2006：607-610.
[2] DANSHINA P V，SCHMALHAUSEN E V，AVETISYAN A V，et al.Mildly oxidized glyceraldehydes3phosphate dehydrogenase as a possible regulator of glycolysis [J].IUBMB Life，2001，51：309-314.
[3] 张旸，郭海俊，刘龙飚，等.星星草PtGAPDH基因的克隆与表达分析[J].草业学报，2014，23（2）：207-214.
[4] BIESECKER G，HARRIS J I，THIERRY J C，et al.Sequence and structure of Dglyceraldehyde 3phosphate dehydrogenase from Bacillus stearothermophilus [J].Nature，1977，266：328-333.
[5] 卢倩，弭晓菊，崔继哲.植物甘油醛3磷酸脱氢酶作用机制的研究进展[J].生物技术通报，2013（8）：1-6.
[6] YANG Y，KWON H B，PENG H P，et al.Stress responses and metabolic regulation of glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase genes in Arabidopsis[J].Plant Physiology，1993，101（1）：209-216.
[7] BARBER R D，HARMER D W，COLEMAN R A，et al.GAPDH as a housekeeping gene：analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues [J].Physiological Genomics，2005，21：389-395. [8] 张霞，王艳，张富春.逆境胁迫下甘油醛3磷酸脱氢酶功能多元化的研究进展[J].植物生理学报，2013，49（1）：24-28.
[9] SIROVER M A.Subcellular dynamics of multifunctional protein regulation：mechanisms of GAPDH intracellular translocation [J].Journal of Cellular Biochemistry，2012，113（7）：2193-2200.
[10] JOU Y，CHOU P H，HE M，et al.Tissuespecific expression and functional complementation of a yeast potassiumuptake mutant by asaltinduced ice plant gene mcSKD1[J].Plant Molecular Biology，2004，54（6）：881-893.
[11] YANG J，YEN H E.Early salt stress effects on the changes in chemical composition in leaves of ice plant and Arabidopsis.A Fourier transform infrared spectroscopy study [J].Plant Physiology，2002，130（2）：1032-1042.
[12] HANSCH R，MENDEL R R，CERFF R，et al.Lightdependent anaerobic induction of the maize glyceraldehyde3phosphate dehydrogenase 4（GapC4）promoter in Arabidopsis thaliana and Nicotiana tabacum[J].Annals of Botany，2003，91：149-154.
[13] 李晓泽，刘关君，杨传平.西伯利亚蓼甘油醛3磷酸脱氢酶基因的cDNA克隆与序列分析[J].植物生理学通讯，2007，43（1）：41-48.
[14] 于丽丽，高彩球，王玉成，等.柽柳甘油醛3磷酸脱氢酶基因的克隆与表达分析 [J].东北林业大学学报，2010，38（7）：105-108.
[15] 齐晓花，许学文，罗晶晶，等.黄瓜3磷酸甘油醛脱氢酶基因CsGAPDH的克隆及其涝胁迫响应分析[J].园艺学报，2011，38（9）：1693-1698.
[16] LI R，SHEN Y.An old method facing a new challenge：Revisiting housekeeping proteins as internal reference control for neuroscience research [J].Life Sciences， 2013，92（13）：747-751.
[17] SANCHEZ B P，EGEA I，SANCHEZ B T.Understanding the mechanisms of chilling injury in bell pepper fruits using the proteomic approach [J].Journal of Proteomics，2012，75（17）：5463-5478.
[18] LIIV I，HALJASORG U，KISAND K.AIREinduced apoptosis is associated with nuclear translocation of stress sensor protein GAPDH [J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2012，423（1）：32-37.
[19] 黎兴江.中国苔藓志 第三卷 [M].北京：科学出版社，2000：54-57.
[20] 宋晓宏，沙伟，林琳，等.毛尖紫萼藓干旱胁迫cDNA文库的构建[J].植物研究，2010，30（6）：713-717.
[21] 沙伟，张梅娟，刘博，等.毛尖紫萼藓抗旱相关基因GpLEA的克隆与表达分析[J].西北植物学报，2013，33（9）：1724-1730.
[22] 杨洋，张智俊，罗淑萍.毛竹甘油醛3磷酸脱氢酶基因的克隆与序列分析 [J].经济林研究，2010，28（3）：7-13.
[23] 梁颖，李玉花.植物中磷酸甘油醛3磷酸脱氢酶（GAPDH）在氧化胁迫下的生理功能[J].植物生理学通讯，2009，45（10）：1027-1032.
[24] BAEK D，JINA Y，JEONG J C，et al.Suppression of reactive oxygen species by glycerald ehyde3phosphate dehydrogenase[J].Phytochemistry，2008，69（2）：333-338.
[25] ZIAF K，LOUKEHAICH R，GONG P J，et al.A Multiple stressresponsive gene ERD15 from Solanum pennellii confers stress tolerance in tobacco [J].Plant and Cell Physiology，2011，52（5）：1055-1067.
[26] MEREWITZ E B，GIANFAGNA T，HUANG B R.Protein accumulation in leaves and roots associated with improved drought tolerance in creeping bentgrass expressing an ipt gene for cytokinin synthesis [J].Journal of Experimental Botany，2010，62（5）：5311-5333.