【摘 要】
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目的对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R124C进行体外定点诱变研究,并构建其真核表达载体,探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMD18-T/BIGH3载
【机 构】
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哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院
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目的对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R124C进行体外定点诱变研究,并构建其真核表达载体,探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMD18-T/BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP上,采用快速体外定点诱变技术获得R124C突变体。瞬时转染体外培养的人角膜上皮细胞,免疫印迹检测野生与突变型BIGH3基因的表达,分别检测细胞培养基中TNF-α的含量,并收集细胞,分析caspase-3活性。结果 PCR成功扩增了野生型和R
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