【摘 要】
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目的 探讨装载miRNA-132的间充质干细胞外泌体在缺氧环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 通过电转法分别将miRNA-132阴性对照(NC)和miRNA-132 mimics转入间充质干细胞来源的外泌体中,即为对照外泌体(Exo)和装载miRNA-132的外泌体(miRNA-132 Exo).在低氧培养箱中,分别用等体积的PBS、Exo和miRNA-132 Exo与HUVEC共培养48 h.利用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用管样形成实验检测细胞成管能力,利用Tran
【机 构】
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沈阳市第四人民医院心血管内科,沈阳 110000
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目的 探讨装载miRNA-132的间充质干细胞外泌体在缺氧环境中对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 通过电转法分别将miRNA-132阴性对照(NC)和miRNA-132 mimics转入间充质干细胞来源的外泌体中,即为对照外泌体(Exo)和装载miRNA-132的外泌体(miRNA-132 Exo).在低氧培养箱中,分别用等体积的PBS、Exo和miRNA-132 Exo与HUVEC共培养48 h.利用CCK-8法检测各组细胞增殖能力,采用管样形成实验检测细胞成管能力,利用Transwell迁移实验检测细胞迁移能力.通过TargetScan数据库预测miRNA-132的下游靶基因,并通过双萤光素酶报告基因实验、qPCR和蛋白质印迹法进行验证.结果 电转法成功将miRNA-132 mimics转入外泌体中.在缺氧条件下培养48 h后,Exo组与miRNA-132 Exo组HUVEC的增殖能力、成管能力和迁移能力均优于PBS组(P均<0.05),并且miRNA-132 Exo组HUVEC的增殖能力、成管能力和迁移能力均优于Exo组(P均<0.01).经TargetScan数据库筛选发现Ras p21蛋白活化子1(RASA1)可能为miRNA-132的靶点并与血管形成过程有关.双萤光素酶报告基因实验证实RASA1是miRNA-132的靶点,qPCR和蛋白质印迹法结果显示缺氧条件下加miRNA-132 Exo处理能抑制HUVEC中RASA1的表达.结论 无论是否装载miRNA-132,间充质干细胞来源的外泌体均可在缺氧环境中保护HUVEC的增殖能力、成管能力和迁移能力,miRNA-132可能通过抑制RASA1的表达增强了这种保护作用.
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