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摘要：
目的：建立用高效液相色谱法测定复方前列安颗粒中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用C18色谱柱（200mm*4.6mm， 5um三津特纳）；流动相：乙腈—水（30：70）；检测波长：270nm，结果：淫羊藿苷在4～36ug/ml（r=0.9998）范围内有良好的线性关系。平均回收率为100.70%，RSD为2.55%。结论：本方法操作简便、准确、灵敏度高，可有效地用于复方前列安颗粒的质量控制。
关键词：复方前列安颗粒；淫羊藿苷；高效液相色谱法
【中图分类号】
R195 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0268-01
慢性前列腺炎是成年男性生殖系统的常见病、多发病，复方前列安颗粒已广泛应用于我院临床患者的治疗，取得较好疗效。该制剂由川萆解、益智仁、淫羊霍、泽泻、黄柏、虎杖、丹参、琥珀、王不留行、延胡索、苦参、黄芪、菟丝子、乌药、甘草等中药材组成，具有清热泄浊、活血祛瘀、补肾利尿的作用。该制剂中药材成分复杂，为了保证该制剂的安全性与有效性，较好地控制本制剂的内在质量，保证临床用药效果，淫羊藿苷作为制剂中的主要成分之一，本文参考文献[1-7]采用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量，作为该制剂生产质量的控制标准。
1 仪器与试药
1.1 仪器：
LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见分光光度检测器、CR-6A色谱数据处理机（日本岛津），MILLIPOKE Smiplicity 185纯水器，Sartorius BP211D 分析天平。
1.2 试药：
淫羊藿苷对照品（批号0737-9910）购于中国药品生物制品检定所。复方前列安蓝颗粒由本医院药剂科提供的中药制剂，所用药材均为生产用同批药材。
试剂：乙腈、甲醇为进口色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2 含量测定
2.1 色谱条件：
C18色谱柱（200mm*4.6mm， 5um三津特纳）；流动相：乙腈—水（30：70）；流速：l.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：270nm；检测灵敏度：0.1AUFS[1-4]
2.2 溶液的制备： ①将10mg淫羊藿苷对照品精密称取放置于100ml容量瓶中，然后再加入一定量的甲醇，摇匀稀释，另外再取5ml淫羊藿苷对照品制成对照品溶液。
②在蒸馏瓶中放置3g本品，加入25ml稀乙醇称重、密塞，放冷称重，减失的重量用稀乙醇补足，取续滤液，摇匀作为供试品溶液。
③将不含淫羊藿的阴性对照品溶液也用同法来进行制备。
2.3 系统适应性试验：
分别取10ul阴性对照溶液、供试品溶液、对照品溶液注入色谱仪，然后对色谱图进行记录，系统适应性试验证明：淫羊藿苷保留时间约为9min，其它杂质峰与淫羊藿苷峰能够较好地进行分离。没有其它干扰峰出现在淫羊藿苷峰位置处。
2.4 线性关系考察：
在100ml容量瓶中精密称取10mg淫羊藿苷对照品，溶解剂加入甲醇，然后再进行稀释，加甲醇至刻度。分别取10 ul上述溶液来进行测定，横坐标为相应浓度，纵坐标为峰面积，线性回归方程为：Y=1.4409*104 X +0.02983*105，r=0.9998，结果证明：在4～36ug/ml范围内，淫羊藿苷的线性关系明显处于良好。
2.5 精密度试验：
精密吸取同一批号（20130713）的淫羊藿苷对照品溶液20ul，连续进样6次，依法测定，RSD为0.70%（n=6）。
2.6 重现性试验：
取批号为20130713的同一批样品进行6次平行试验，依法测定之后再对淫羊藿苷的含量进行计算，RSD为1.17%（n=6）。
2.7 回收率试验：
在2ml甲醇溶液（已经加入淫羊藿苷对照品）中分别加入5份已测知含量的同一样品，然后再依法测定，接下来是对回收率进行计算，RSD为2.55%，平均回收率为100.7%（n=5）。
2.8 稳定性试验：
在室温下放置供试品溶液，然后分别在不同的时间段选取供试品溶液进样，对含量进行测定，淫羊藿苷峰面积的RSD结果为1.02%，这充分说明在24h内供试品溶液是处于较为稳定的状态。
2.9 样品测定：
将供试品溶液和对照品溶液按上述方法进行制备，分别取10ul供试品溶液和10ul对照品溶液进样，测定时要基于上述色谱条件。样品测定结果见表1。
表1 样品中淫羊藿苷的含量测定结果
3 小结与讨论
3.1 中药制剂中的成分比较复杂，淫羊藿苷为本制剂主要成分之一，黄酮醇苷类化合物是其较为主要的成分，很容易在水、甲醇、乙醇等溶剂中溶解。分别采用甲醇、乙醇、稀乙醇、水为溶媒来进行提取试验，结果稀乙醇提取所得样本含量较高，分离效果较好。
3.2 在定量分析的流动相系统中，若淫羊藿苷的保留时间过短，淫羊藿苷的峰形明显拖尾，本方法选择在保留时间约9min时，峰形对称，且阴性样品无其它成分存在，线性考察、精密度、重现性及回收率试验均符合制剂质量标准要求。
3.3 淫羊藿苷为本制剂主要成分之一，故选择作为定量分析的参考标准。但由于淫羊藿药材的品种、产地和采摘时间的不同，其淫羊藿苷含量差异比较大，因此在制剂生产中应注意淫羊藿药材的来源及时调整制剂的生产工艺疗程。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.36～37.
[2]卫莹芳主编.中药鉴定学（高等医药院校教材），上海：上海科学技术出版社，2010.260～261.
[3]高学敏主编.中药学（高等医药院校教材），北京：中国中医药出版社，2007.442～443.
[4]于洋，李倚云，张厚宝等.补肾强身胶囊质量标准的研究.中国实验方剂学杂志，2003.9（1）：9.
[5]朱炳辉.安神补脑液中淫羊藿甙含量测定[J].中国实验方剂学杂志，1995.5（6）：8.
[6]张仁斌.高效液相色谱在医药研究中的应用[M].上海：上海科学技术出版社，1983.121.
[7]柯铭清编.中草药有效成分理化与药理特性[M].长沙：湖南科学技术出版社，1982.11.
目的：建立用高效液相色谱法测定复方前列安颗粒中淫羊藿苷含量的方法。方法：采用C18色谱柱（200mm*4.6mm， 5um三津特纳）；流动相：乙腈—水（30：70）；检测波长：270nm，结果：淫羊藿苷在4～36ug/ml（r=0.9998）范围内有良好的线性关系。平均回收率为100.70%，RSD为2.55%。结论：本方法操作简便、准确、灵敏度高，可有效地用于复方前列安颗粒的质量控制。
关键词：复方前列安颗粒；淫羊藿苷；高效液相色谱法
【中图分类号】
R195 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）08-0268-01
慢性前列腺炎是成年男性生殖系统的常见病、多发病，复方前列安颗粒已广泛应用于我院临床患者的治疗，取得较好疗效。该制剂由川萆解、益智仁、淫羊霍、泽泻、黄柏、虎杖、丹参、琥珀、王不留行、延胡索、苦参、黄芪、菟丝子、乌药、甘草等中药材组成，具有清热泄浊、活血祛瘀、补肾利尿的作用。该制剂中药材成分复杂，为了保证该制剂的安全性与有效性，较好地控制本制剂的内在质量，保证临床用药效果，淫羊藿苷作为制剂中的主要成分之一，本文参考文献[1-7]采用高效液相色谱法测定制剂中淫羊藿苷的含量，作为该制剂生产质量的控制标准。
1 仪器与试药
1.1 仪器：
LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见分光光度检测器、CR-6A色谱数据处理机（日本岛津），MILLIPOKE Smiplicity 185纯水器，Sartorius BP211D 分析天平。
1.2 试药：
淫羊藿苷对照品（批号0737-9910）购于中国药品生物制品检定所。复方前列安蓝颗粒由本医院药剂科提供的中药制剂，所用药材均为生产用同批药材。
试剂：乙腈、甲醇为进口色谱纯，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯。
2 含量测定
2.1 色谱条件：
C18色谱柱（200mm*4.6mm， 5um三津特纳）；流动相：乙腈—水（30：70）；流速：l.0ml/min；柱温：25℃；检测波长：270nm；检测灵敏度：0.1AUFS[1-4]
2.2 溶液的制备： ①将10mg淫羊藿苷对照品精密称取放置于100ml容量瓶中，然后再加入一定量的甲醇，摇匀稀释，另外再取5ml淫羊藿苷对照品制成对照品溶液。
②在蒸馏瓶中放置3g本品，加入25ml稀乙醇称重、密塞，放冷称重，减失的重量用稀乙醇补足，取续滤液，摇匀作为供试品溶液。
③将不含淫羊藿的阴性对照品溶液也用同法来进行制备。
2.3 系统适应性试验：
分别取10ul阴性对照溶液、供试品溶液、对照品溶液注入色谱仪，然后对色谱图进行记录，系统适应性试验证明：淫羊藿苷保留时间约为9min，其它杂质峰与淫羊藿苷峰能够较好地进行分离。没有其它干扰峰出现在淫羊藿苷峰位置处。
2.4 线性关系考察：
在100ml容量瓶中精密称取10mg淫羊藿苷对照品，溶解剂加入甲醇，然后再进行稀释，加甲醇至刻度。分别取10 ul上述溶液来进行测定，横坐标为相应浓度，纵坐标为峰面积，线性回归方程为：Y=1.4409*104 X +0.02983*105，r=0.9998，结果证明：在4～36ug/ml范围内，淫羊藿苷的线性关系明显处于良好。
2.5 精密度试验：
精密吸取同一批号（20130713）的淫羊藿苷对照品溶液20ul，连续进样6次，依法测定，RSD为0.70%（n=6）。
2.6 重现性试验：
取批号为20130713的同一批样品进行6次平行试验，依法测定之后再对淫羊藿苷的含量进行计算，RSD为1.17%（n=6）。
2.7 回收率试验：
在2ml甲醇溶液（已经加入淫羊藿苷对照品）中分别加入5份已测知含量的同一样品，然后再依法测定，接下来是对回收率进行计算，RSD为2.55%，平均回收率为100.7%（n=5）。
2.8 稳定性试验：
在室温下放置供试品溶液，然后分别在不同的时间段选取供试品溶液进样，对含量进行测定，淫羊藿苷峰面积的RSD结果为1.02%，这充分说明在24h内供试品溶液是处于较为稳定的状态。
2.9 样品测定：
将供试品溶液和对照品溶液按上述方法进行制备，分别取10ul供试品溶液和10ul对照品溶液进样，测定时要基于上述色谱条件。样品测定结果见表1。
表1 样品中淫羊藿苷的含量测定结果
3 小结与讨论
3.1 中药制剂中的成分比较复杂，淫羊藿苷为本制剂主要成分之一，黄酮醇苷类化合物是其较为主要的成分，很容易在水、甲醇、乙醇等溶剂中溶解。分别采用甲醇、乙醇、稀乙醇、水为溶媒来进行提取试验，结果稀乙醇提取所得样本含量较高，分离效果较好。
3.2 在定量分析的流动相系统中，若淫羊藿苷的保留时间过短，淫羊藿苷的峰形明显拖尾，本方法选择在保留时间约9min时，峰形对称，且阴性样品无其它成分存在，线性考察、精密度、重现性及回收率试验均符合制剂质量标准要求。
3.3 淫羊藿苷为本制剂主要成分之一，故选择作为定量分析的参考标准。但由于淫羊藿药材的品种、产地和采摘时间的不同，其淫羊藿苷含量差异比较大，因此在制剂生产中应注意淫羊藿药材的来源及时调整制剂的生产工艺疗程。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010.36～37.
[2]卫莹芳主编.中药鉴定学（高等医药院校教材），上海：上海科学技术出版社，2010.260～261.
[3]高学敏主编.中药学（高等医药院校教材），北京：中国中医药出版社，2007.442～443.
[4]于洋，李倚云，张厚宝等.补肾强身胶囊质量标准的研究.中国实验方剂学杂志，2003.9（1）：9.
[5]朱炳辉.安神补脑液中淫羊藿甙含量测定[J].中国实验方剂学杂志，1995.5（6）：8.
[6]张仁斌.高效液相色谱在医药研究中的应用[M].上海：上海科学技术出版社，1983.121.
[7]柯铭清编.中草药有效成分理化与药理特性[M].长沙：湖南科学技术出版社，1982.11.