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摘 要：建立反相高效液相色谱法测定巴中栀子中熊果酸的含量。方法：采用奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm），甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（ 取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml） （5∶85：10）为流动相，检测波长为210nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。熊果酸平均回收率分别为99.3%。结论：本法简便、准确，可用于巴中栀子中熊果酸的含量测定。
关键词：栀子；含量；测定
栀子是茜草科植物栀子的果实。栀子的果实是传统中药，具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用。栀子气味：苦、寒、无毒。《药性赋》记载：“味苦，性大寒，无毒。沉也，阴也。其用有二：疗心中懊憹颠倒而不得眠，治脐下血滞小便而不得利。易老云：轻飘而象肺，色赤而象火，又能泻肿中之火。”栀子临床常用于热病心烦、黄疸尿赤、血热吐衄、血淋涩痛、目赤肿痛、火毒疮疡等。熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，为栀子主要成分之一。熊果酸具有迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用[1-5]。栀子生于丘陵山地或山坡灌林中，分布于中南、西南及江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾等地。本文采用高效液相法对巴中栀子中的熊果酸的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；HH-601超级恒温水浴（北京富瑞恒创科技有限公司）；08890-xx超声波清洗器（北京中科科尔仪器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；ULABO实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：熊果酸
1.4 试剂：甲醇（上海盈公生物技术有限公司）、磷酸（广州市西陇化工有限公司）、冰醋酸（广州市西陇化工有限公司）、醋酸钠（利津县东海工贸有限公司）、磷酸二氢铵（上海科丰化学试剂有限公司）、三乙胺（北京亚太龙兴化工有限公司）、乙腈（上海科丰化学试剂有限公司）。
1.5 试药：巴中栀子
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相，检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取熊果酸对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密称定重量，超声处理30分钟，放冷，精密称定，用甲醇补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4 精密度试验
精密称取熊果酸对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量熊果酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的栀子样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.73%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入熊果酸对照品，按项下方法制备成110%、120%、130%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.85%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果样品的含量分别为0.32毫克/克、0.35毫克/克、0.33毫克/克。
3 讨论
分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶65：30），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于巴中栀子中熊果酸的含量测定。
参考文献
[1]朱萱，中月明.熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响[A].中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C].2007.
[2]王婷，宋怀燕，赵德明.熊果酸抗小鼠移植性肿瘤的实验研究[A].中國畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C].2006.
[3]闫天中，靳凤烁，谢立平，张祥生，李启忠.熊果酸对前列腺癌细胞雄激素非依赖性的逆转作用[A].第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C].2008.
[4]王涛，邵敬伟，陈剑锋，林凤屏，郭养浩.枇杷叶中熊果酸的分离纯化及抗癌活性研究[A].药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集（上）[C].2008.
[5]李利涛，张祥建，崔丽丽，王力娜，刘海超，季辉，杜媛媛.熊果酸在缺血性脑血管病中发挥神经保护作用的机制：激活Nrf2信号通路[A].中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）[C].2014.
关键词：栀子；含量；测定
栀子是茜草科植物栀子的果实。栀子的果实是传统中药，具有护肝、利胆、降压、镇静、止血、消肿等作用。栀子气味：苦、寒、无毒。《药性赋》记载：“味苦，性大寒，无毒。沉也，阴也。其用有二：疗心中懊憹颠倒而不得眠，治脐下血滞小便而不得利。易老云：轻飘而象肺，色赤而象火，又能泻肿中之火。”栀子临床常用于热病心烦、黄疸尿赤、血热吐衄、血淋涩痛、目赤肿痛、火毒疮疡等。熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，为栀子主要成分之一。熊果酸具有迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用[1-5]。栀子生于丘陵山地或山坡灌林中，分布于中南、西南及江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾等地。本文采用高效液相法对巴中栀子中的熊果酸的进行了含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器：EX1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；B03001-004在线脱气机（上海笛柏实验设备有限公司）；HH-601超级恒温水浴（北京富瑞恒创科技有限公司）；08890-xx超声波清洗器（北京中科科尔仪器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；ULABO实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；UV1600紫外可见分光光度计（西安华辰乐天实验室设备有限公司）；实验室用高纯水制备器（北京科誉兴业科技发展有限公司）；XSYF-D实验室废水处理设备（北京湘顺源科技有限公司）。
1.2 色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。
1.3 对照品：熊果酸
1.4 试剂：甲醇（上海盈公生物技术有限公司）、磷酸（广州市西陇化工有限公司）、冰醋酸（广州市西陇化工有限公司）、醋酸钠（利津县东海工贸有限公司）、磷酸二氢铵（上海科丰化学试剂有限公司）、三乙胺（北京亚太龙兴化工有限公司）、乙腈（上海科丰化学试剂有限公司）。
1.5 试药：巴中栀子
2 测定方法确定
2.1 色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。流动相：甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相，检测波长：210nm，流速：1.0m·min-1。柱温：30℃。理论板数按熊果酸峰计算应不得低于2000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取熊果酸对照品适量，置容量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密量取供试品，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20mL，密塞，精密称定重量，超声处理30分钟，放冷，精密称定，用甲醇补足重量，摇匀，滤过。取续滤液，即得。
2.4 精密度试验
精密称取熊果酸对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为0.3mg·mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μl，连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.73%，表明本方法精密度良好。
2.5 对照品的线性考察
精密称取适量熊果酸对照品，加入流动相溶液使溶解分别配制成每毫升含0.1、0.15、0.25、0.35、0.4.、0.45、0.55毫克的溶液。分别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱条件测定，记录色谱峰。以峰面积（Y）为纵坐标，对照品进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，熊果酸在0.1～0.55mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
2.6 重现性试验
称取同一批的栀子样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.73%，结果表明此方法的重现性良好。
2.7 准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加入熊果酸对照品，按项下方法制备成110%、120%、130%。取模拟样品照“含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.3%，RSD为0.85%。
2.8 样品含量测定
依照上述含量测定方法，再按外标法以峰面积计算样品的含量，结果样品的含量分别为0.32毫克/克、0.35毫克/克、0.33毫克/克。
3 讨论
分别考察0.04moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.01），甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶65：30），甲醇-1%冰醋酸溶液（28∶72），甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）不同比例的流动相，结果以甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-乙腈-磷酸盐溶液（取磷酸二氢钾1g，加水800毫升溶解，加1毫升磷酸，用水稀释至1000ml）（5∶85：10）为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于巴中栀子中熊果酸的含量测定。
参考文献
[1]朱萱，中月明.熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响[A].中华医学会第11届全国内科学术会议论文汇编[C].2007.
[2]王婷，宋怀燕，赵德明.熊果酸抗小鼠移植性肿瘤的实验研究[A].中國畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C].2006.
[3]闫天中，靳凤烁，谢立平，张祥生，李启忠.熊果酸对前列腺癌细胞雄激素非依赖性的逆转作用[A].第十五届全国泌尿外科学术会议论文集[C].2008.
[4]王涛，邵敬伟，陈剑锋，林凤屏，郭养浩.枇杷叶中熊果酸的分离纯化及抗癌活性研究[A].药用植物化学与中药有效成分分析研讨会论文集（上）[C].2008.
[5]李利涛，张祥建，崔丽丽，王力娜，刘海超，季辉，杜媛媛.熊果酸在缺血性脑血管病中发挥神经保护作用的机制：激活Nrf2信号通路[A].中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编（下）[C].2014.