探讨缓激肽对机械刺激引起的心肌细胞肥大的抑制作用及其可能机制。
方法体外分离培养新生大鼠心肌细胞,并接种在特制的硅胶皿上,分为对照组、机械刺激组(牵张硅胶皿牵张120% 30 min)和机械刺激+缓激肽组(1×10-8 mol/L的缓激肽作用24 h后再牵张120%作用30 min),每组3个复孔,实验至少重复3次。以3H-亮氨酸掺入法检测各组心肌细胞蛋白合成率,心肌细胞α-MHC免疫荧光染色、以激光共聚焦成像测算心肌细胞表面积。提取各组心肌细胞RNA和总蛋白后分别以实时PCR和Western blot检测心肌细胞中心房利钠肽 (ANP)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2)mRNA表达和血管紧张素转换酶(ACE)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1受体)、钙调神经磷酸酶 (CaN)的蛋白表达水平。
结果机械刺激组和机械刺激+缓激肽组大鼠心肌细胞表面积均显著大于对照组[(973±103)和(603±74) μm2 分别比(312±29) μm2,P分别<0.01和0.05]。机械刺激组和机械刺激+缓激肽组大鼠心肌细胞蛋白合成率均显著高于对照组,分别为对照组的(4.5±3.7)和(3.0±1.9)倍,ANP蛋白表达水平亦均显著高于对照组,分别为对照组的(4.1±0.4)和(2.3±0.2)倍,而SERCA2蛋白表达水平则均显著低于对照组,分别为对照组的(0.52±0.05)和(0.79±0.08)倍(P<0.01或0.05)。机械刺激组和机械刺激+缓激肽组大鼠心肌细胞ACE蛋白表达水平均显著高于对照组,分别为对照组的(3.2±0.4)和(2.7±0.4)倍(P均<0.05),机械刺激组与机械刺激+缓激肽组组间比较差异无统计学意义。机械刺激组和机械刺激+缓激肽组大鼠心肌细胞AT1受体蛋白表达水平均显著高于对照组,分别为对照组的(3.7±0.3)和(2.1±0.2)倍(P分别<0.01和0.05),且机械刺激+缓激肽组显著低于机械刺激组(P<0.05)。机械刺激组和机械刺激+缓激肽组大鼠心肌细胞磷酸化CaN表达水平均高于对照组,分别为对照组的(6.4±0.6)和(3.6±0.3)倍(P分别<0.01和0.05),且机械刺激+缓激肽组显著低于机械刺激组(P<0.05)。
结论缓激肽可通过抑制Ca2+/CaN信号通路抑制机械刺激诱发的大鼠心肌细胞肥大。