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目的
探讨miR–200b靶向调控PROM1的表达对胶质瘤细胞侵袭能力的影响以及miR–200b抑瘤的分子机制。
方法构建PROM1 3′端非翻译区(3′UTR)荧光素酶报告载体,荧光素酶报告检测miR–200b对PROM1 3′UTR–荧光素酶活性的影响。将miR–200b模拟物转染胶质瘤U87细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot检测PROM1 mRNA和蛋白的表达水平。将PROM1 siRNA转染U87细胞,Transwell侵袭实验检测PROM1下调对U87细胞侵袭能力的影响。
结果双荧光素酶报告检测显示,miR–200b能特异性地与PROM1 3′UTR结合,抑制其荧光素酶活性,其荧光素酶活性强度下降了57.0%,差异有统计学意义(P<0.01)。过表达miR–200b的U87细胞中PROM1蛋白和mRNA表达水平均降低,转染miR–200b组和对照组中PROM1 mRNA的表达水平分别为0.64±0.05和0.95±0.09,差异有统计学意义(P<0.05)。siRNA干扰PROM1表达能抑制U87细胞的生长和侵袭能力。转染PROM1 siRNA组和对照组中穿膜细胞数分别为(85±9)个和(155±16)个,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论miR–200b可通过靶向调控PROM1的表达而抑制胶质瘤细胞的侵袭力。