【摘 要】
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D-对羟基苯甘氨酸（D-HPG）是半合成青霉素的一种必需医药中间体。由于生物酶法属于环境友好的合成技术，酶法逐渐成为工业领域中化学合成法的理想替代方法。为了实现D-HPG酶法生产的工业规模化，首先构建了D-海因酶（DHD）和D-氨甲酰水解酶（DCB）的重组菌，并使目的蛋白可溶性表达。然后，基于单因素实验考察诱导剂浓度、温度、pH、碳源和氮源等条件对DHD与DCB重组菌酶活性的影响，进一步使用响应面
【基金项目】
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">江苏省研究生科研与实践创新计划项目（SJCX201239）；
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D-对羟基苯甘氨酸（D-HPG）是半合成青霉素的一种必需医药中间体。由于生物酶法属于环境友好的合成技术，酶法逐渐成为工业领域中化学合成法的理想替代方法。为了实现D-HPG酶法生产的工业规模化，首先构建了D-海因酶（DHD）和D-氨甲酰水解酶（DCB）的重组菌，并使目的蛋白可溶性表达。然后，基于单因素实验考察诱导剂浓度、温度、pH、碳源和氮源等条件对DHD与DCB重组菌酶活性的影响，进一步使用响应面法对限速酶DCB培养基成分进行优化。优化后最佳培养基配方为：淀粉和葡萄糖分别为DHD与DCB重组菌的碳源，大豆蛋白胨为氮源，添加阿拉伯糖为诱导剂。5 L发酵罐的发酵结果为：获得DHD菌体（53.4±0.75）g/L,DCB菌体（46.7±0.96）g/L。最后对双酶催化D-HPG条件进行优化，产率可达（92.43±3.76）%,为工业化生产D-对羟基苯甘氨酸提供了理论和技术支持。
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