【摘 要】
：
目的 应用基因工程技术在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp) Tp0453(62～224位氨基酸)重组蛋白,为提高梅毒血清学诊断试剂的特异性提供实验基础.方法 采用PCR法从Tp全基因组中扩增目的片段Tp0453(第184～672位核苷酸),T-A克隆后构建原核表达质粒pQE30-Tp0453,酶切鉴定后转化E.coli M15,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋
【机 构】
：
050082石家庄,白求恩国际和平医院检验实验科,050082石家庄,白求恩国际和平医院检验实验科,050082石家庄,白求恩国际和平医院检验实验科,050082石家庄,白求恩国际和平医院检验实验科,
论文部分内容阅读
目的 应用基因工程技术在大肠埃希菌中表达梅毒螺旋体(Tp) Tp0453(62～224位氨基酸)重组蛋白,为提高梅毒血清学诊断试剂的特异性提供实验基础.方法 采用PCR法从Tp全基因组中扩增目的片段Tp0453(第184～672位核苷酸),T-A克隆后构建原核表达质粒pQE30-Tp0453,酶切鉴定后转化E.coli M15,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达,Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白,表达产物经Western印迹鉴定其免疫反应性.以纯化的重组抗原建立双抗原夹心法ELISA,检测经Tp抗体明胶颗粒凝集试验(TPPA)法确证的梅毒阳性血清48份、阴性血清40份.结果 PCR法扩增出约490 bp目的片段,成功构建原核表达质粒pQE30-Tp0453,并在E.coli M15中表达,蛋白表达率为18％,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步测定目的蛋白的相对分子质量为21 000,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达,纯化后蛋白纯度＞95％,Western印迹证实该蛋白能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应.双抗原夹心法ELISA检测88份临床标本,灵敏度为97.9％(47/48),特异度为100.0％(40/40),与TPPA的总符合率为98.9％(87/88).结论 所表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫反应性,为开发临床检测效果更好的梅毒诊断试剂盒提供了实验基础。
其他文献
目的 分析AIDS患者合并HBV和HCV感染的临床特征,以及含拉米夫定(3TC)的抗反转录病毒治疗(ART)对肝炎病毒复制的影响.方法 2004年至2010年武汉大学中南医院收治合并HBV感染的AIDS患者199例,其中HIV/HBV/HCV三重感染76例,HIV/HBV两重感染123例,对患者常规检测HBsAg和抗-HBc等,分析含3TC的ART前后HBV DNA及HCVRNA变化,并比较终末期
高效联合抗反转录病毒治疗(HAART)广泛应用以来,HIV-1感染者的期望寿命显著延长,随之而来的非艾滋病并发症逐渐增多,其中骨质疏松和骨量减少引起了学者们越来越多的关注.研究发现,HIV-1感染者骨质疏松和骨量减少的发生率远远高于普通人群,但发病机制仍不明确[1-5].除具有一般人群骨质疏松的危险因素外,HIV-1感染者还有其自身特点,如抗病毒药物也可能干扰骨代谢,使HIV-1感染者的骨密度发生
目的 探讨大片形吸虫感染的流行病学特点、临床表现、诊断和治疗方法,为大片形吸虫病的诊治提供参考.方法 回顾性分析4例确诊为大片形吸虫病患者的流行病学资料、临床表现、实验室检查结果、影像学表现、诊断和治疗转归情况.结果 4例大片形吸虫病患者均为云南省大理州宾川县农民,均表现为发热、肝区疼痛和叩痛、肝脏肿大、嗜酸粒细胞增多、球蛋白升高、血WBC和中性粒细胞升高、不同程度的贫血,肝脏CT扫描均提示肝实质
江苏省“十四五”发展规划明确提出，要深化建设具有全球影响力的产业科技创新中心，全力打造具有国际竞争力的先进制诰业基地，积极构建具有世界聚合力的双向开放枢纽。有效实施这一具体行动，关键是构建产业技术创新人才高地，加快形成与“一中心一基地一枢纽”相匹配的高素质、大规模、国际化的优秀产业技术创新人才队伍。 一、充分发挥江苏产业技术创新人才的现实优势 产业技术创新人才政策体系不断健全。先后出台加快推进
1963年,美国医学家Blumberg将一例反复输血的血友病患者与一名澳大利亚土著居民的血清标本做琼脂糖凝胶扩散试验,意外地发现了沉淀带.进一步研究证实形成沉淀带的抗原就是HBsAg,当时被称为"澳大利亚抗原",简称"澳抗".这一经典的、以抗原抗体反应为基本原理的免疫凝集试验,是发现HBV的重要基础.Blumberg因此在1976年被授予诺贝尔医学和生理学奖。
HBV感染的机制复杂，其中机体免疫清除病毒的能力发挥极为重要的作用，既能够控制病毒的复制和清除、促进病情恢复和使机体产生保护性的免疫应答，也会导致炎性损伤迁延不愈。可溶性人类白细胞抗原工（sHLA-工）类分子是肝细胞破坏时的释放物，除反映肝细胞损伤外，还是一种重要的免疫调节物质.可溶性肿瘤坏死因子相关性凋亡诱导配体（sTRAIL）对正常生理状态下的机体组织没有毒性，病理状态下被激活参与机体的免疫反
结核性脑膜炎(tuberculosis meningitis,TBM)是最严重的结核病,病死率高,后遗症严重[1],早期诊断是改善预后的关键.TBM诊断的金标准仍是脑脊液(CSF)涂片或培养分离出结核分枝杆菌[2].本研究回顾性分析32例脑脊液结核分枝杆菌阳性的TBM患者资料,探讨其临床特点,以期能提高TBM的诊断率,减少误诊、漏诊,改善患者的预后。
患者女,66岁.入院前4d不明原因出现全身皮肤发红、瘙痒,逐渐溃烂,以躯干部最明显,部分结痂、脱落,伴发热,体温最高39.6℃,在当地山区医院治疗无效(诊断、用药情况不详),以麻风病可能收住院.其丈夫2个月前被确诊为新发麻风病,已转入麻风病疗养院治疗至今.患者3周前感身体不适,面部麻木,在勉县疾病预防控制中心指导下预防性服用氨苯砜(上海华氏制药有限公司)100 mg/d.既往无药物过敏史.入院体格
2021年7月，习近平总书记在中央全面深化改革委员会第二十次会议上深刻指出，要对标高标准国际经贸规则，积极推动制度创新，以更大力度谋划和推进自由贸易试验区高质量发展。江苏自贸试验区作为全省高水平改革开放试验田，应坚决扛起“争当表率、争做示范、走在前列”使命担当，深入推进高水平开放、制度型开放，为全省经济社会高质量发展和现代化建设“六个率先走在前列”做出更大贡献。 聚焦“两区定位”，自贸试验区
患者男,47岁.入院前3d无明显诱因出现发热,体温38℃,伴全身不适、四肢肌肉酸痛,无恶心、呕吐、头痛、眼眶痛和腰痛,自服解热镇痛药物,体温暂时下降.3h前在工作中出现头晕,发热,当时测血压80/60 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)而入院.既往有高血压史2年,1984年曾患肾综合征出血热,1986年在西安交通大学医学院入学体格检查时查抗汉坦病毒IgG抗体阳性.近期到过西安市郊区,