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【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）02-0374-01
MC是人类上呼吸道的常居菌种，为条件致病菌。该菌可引起人类的多种感染。可累及全身[1]。国外资料显示，MC在成人下呼吸道感染及儿童肺炎、中耳炎等标本中的分离率，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌列第三位[2]。因此，快速鉴定MC具有重要的临床意义。我们用3-乙酰吲哚纸片法检测乙酰酯酶，快速鉴定MC。并测定4种β-内酰胺抗生素的复方制剂及亚胺培南/西司他丁对β-内酰胺酶阳性MC的抗菌活性。报告如下。
材料和方法
（1）材料
1.菌株来源：MC（114株）、淋病奈瑟菌（8株）、脑膜炎奈瑟菌（2株）、奈瑟菌属（76株）、莫拉菌亚属（12株）、博德特菌属（3株）、不动杆菌属（79株）均为临床分离株。标准菌株MC9602，9707，0101为全国临床检验中心质控菌株。
2.培养基：5%羊血琼脂培养基（SBA），5%兔血巧克力琼脂培养基（RChoc），5%羊血巧克力琼脂培养基（SChoc），含50?g/ml万古霉素的兔血巧克力琼脂培养基（Choc—V），淋病奈瑟菌培养基（NGA），MH培养基（MHA），5% 羊血MH培养基（MHB），脑心琼脂培养基（BCA），营养琼脂培养基（NUA），中国蓝琼脂培养基（ZLA），DNA琼脂培养基均为本室自制。
3.试剂：蛋白胨、DNA 琼脂粉、MH 琼脂粉、VlTEK-（NHI和GNI）鉴定试卡购自生物梅里埃公司。万古霉素为英国BD公司产品，盐酸四甲基对苯二胺、3一乙酰吲哚购自SIGMA公司，Nitrocefin购自OXOID公司（英国）。氧化酶纸片（1%盐酸四甲基对苯二胺溶液浸泡纸片后吹干备用），乙酰酯酶纸片（100 mg/ml 3.乙酰吲哚丙酮溶液浸泡50片纸片后吹干备用）[3]，Nitrocefin纸片（12.5 ?g/片，Nitrocefin吹干备用）。
4.抗生素：哌拉西林（PIP）；氨苄西林（AMP），哌拉西林/舒巴坦（PIPC/SBT）（4：1），哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TAZ）（8：1），氨苄西林/舒巴坦（AMP/SBT）（2：1），头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SBT）（1：1），亚胺培南/西司他丁（M/CST）（1：1），均购于英国BD公司。
（2）方法
1.菌株分离与鉴定：将可疑标本接种于SBA和Choc-V琼脂平板上，置5%C02孵箱，35℃培养24-72h观察结果。细菌的分离培养和鉴定按文献[4]进行，分离到的菌株经涂片革兰染色镜检、触酶、氧化酶试验后，用VlTEK（NHI和GNI）鉴定试卡鉴定到种。
2.氧化酶试验：按文献[4]进行。
3.DNA酶试验：按文献[4]进行。
4.乙酰酯酶试验：用无菌生理盐水将3-乙酰吲哚纸片沾湿，取待检菌落涂在纸片上，3min内出现蓝绿色为阳性反应。
5.β-内酰胺酶试验：用无菌蒸馏水将Nitrocefin纸片沾湿，取MC菌落涂在纸片上，5min内纸片变红色者判为B内酰胺酶阳性。
6.药敏试验：根据美国临床实验室标准化委员会2007年版标准，采用琼脂平皿二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用多点接种仪定量种菌。
二、结果
1.氧化酶试验：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均为阳性，79株不动杆菌氧化酶为阴性。
2.DNA酶试验：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均为阳性，79株不动杆菌DNA酶均为阴性。卡他莫拉菌对DNA酶的敏感性为100%，特异性为100% 。
3.乙酰酯酶试验：8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌亚属、3株博德特菌乙酰酯酶均为阴性，79株不动杆菌中乙酰酯酶阳性63株（占79.7% ），114株卡他莫拉菌乙酰酯酶全为阳性。卡他莫拉菌对乙酰酯酶的敏感性为100% ，特异性为77.7% 。但与近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属）比较特异性为100% 。
4.β-内酰胺酶：114株MC中B内酰胺酶阳性107株，12株莫拉菌亚属β-内酰胺酶阳性3株，8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、3株博德特菌β-内酰胺酶均为阴性。
三、讨论
MC与许多严重感染性疾病有关，但由该菌引起的感染发病率一直难以估计。因为，MC生长较缓慢，在不含血的培养基（营养琼脂、MH琼脂、脑心琼脂）上生长不良，菌落及菌体形态与许多近缘菌相似，分离及鉴定较为困难。为此，提高MC分离率已成为临床诊断和治疗MC感染所急需。我们采用3-乙酰吲哚纸片法检测MC产生的乙酰酯酶快速鉴定MC，此法操作简便，易于判断，敏感性为100% ，和近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属）比较特异性为100% ，与DNA酶试验及生化鉴定结果的相关性比较均为100% 。虽然不动杆菌的乙酰酯酶阳性率高达79.7% ，但是不动杆菌的氧化酶阴性，DNA酶试验阴性，在普通琼脂及中国蓝琼脂上生长良好，且菌落较MC湿润和光滑，稍加注意不难区别。
对114株MC的β-内酰胺酶检测结果分析表明，其阳性率高达93.0%，应引起临床医生的重视。哌拉西林/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦及亚胺培南/西司他丁对β-内酰胺酶阳性MC有很好的抗菌活性。在MC感染的治疗中，应选用含β-内酰胺酶抑制剂的复方制剂或用对p内酰胺酶头孢菌素进行治疗。MC的近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属等）中，β-内酰胺酶的阳性率非常低，因此，β-内酰胺酶试验也可作为MC与近缘菌的辅助试验。
参考文献：
[1]李光辉.卡他布兰汉菌研究现状.国外医学微生物学分册，199518：20.
[2]缪东幸.小儿呼吸道卡他布兰汉氏球菌感染.国外医学儿科学分册。1994，21：1-4.
[3]杨秀华。刘小兰，尚彦，等.乙酰吲噪纸片法快速鉴定卡他莫拉菌.中华医学检验杂志，1999，2 ：152.153.
[4]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第2版.南京：东南大学出版社，1997.470-489.
MC是人类上呼吸道的常居菌种，为条件致病菌。该菌可引起人类的多种感染。可累及全身[1]。国外资料显示，MC在成人下呼吸道感染及儿童肺炎、中耳炎等标本中的分离率，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌列第三位[2]。因此，快速鉴定MC具有重要的临床意义。我们用3-乙酰吲哚纸片法检测乙酰酯酶，快速鉴定MC。并测定4种β-内酰胺抗生素的复方制剂及亚胺培南/西司他丁对β-内酰胺酶阳性MC的抗菌活性。报告如下。
材料和方法
（1）材料
1.菌株来源：MC（114株）、淋病奈瑟菌（8株）、脑膜炎奈瑟菌（2株）、奈瑟菌属（76株）、莫拉菌亚属（12株）、博德特菌属（3株）、不动杆菌属（79株）均为临床分离株。标准菌株MC9602，9707，0101为全国临床检验中心质控菌株。
2.培养基：5%羊血琼脂培养基（SBA），5%兔血巧克力琼脂培养基（RChoc），5%羊血巧克力琼脂培养基（SChoc），含50?g/ml万古霉素的兔血巧克力琼脂培养基（Choc—V），淋病奈瑟菌培养基（NGA），MH培养基（MHA），5% 羊血MH培养基（MHB），脑心琼脂培养基（BCA），营养琼脂培养基（NUA），中国蓝琼脂培养基（ZLA），DNA琼脂培养基均为本室自制。
3.试剂：蛋白胨、DNA 琼脂粉、MH 琼脂粉、VlTEK-（NHI和GNI）鉴定试卡购自生物梅里埃公司。万古霉素为英国BD公司产品，盐酸四甲基对苯二胺、3一乙酰吲哚购自SIGMA公司，Nitrocefin购自OXOID公司（英国）。氧化酶纸片（1%盐酸四甲基对苯二胺溶液浸泡纸片后吹干备用），乙酰酯酶纸片（100 mg/ml 3.乙酰吲哚丙酮溶液浸泡50片纸片后吹干备用）[3]，Nitrocefin纸片（12.5 ?g/片，Nitrocefin吹干备用）。
4.抗生素：哌拉西林（PIP）；氨苄西林（AMP），哌拉西林/舒巴坦（PIPC/SBT）（4：1），哌拉西林/他唑巴坦（PIP/TAZ）（8：1），氨苄西林/舒巴坦（AMP/SBT）（2：1），头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SBT）（1：1），亚胺培南/西司他丁（M/CST）（1：1），均购于英国BD公司。
（2）方法
1.菌株分离与鉴定：将可疑标本接种于SBA和Choc-V琼脂平板上，置5%C02孵箱，35℃培养24-72h观察结果。细菌的分离培养和鉴定按文献[4]进行，分离到的菌株经涂片革兰染色镜检、触酶、氧化酶试验后，用VlTEK（NHI和GNI）鉴定试卡鉴定到种。
2.氧化酶试验：按文献[4]进行。
3.DNA酶试验：按文献[4]进行。
4.乙酰酯酶试验：用无菌生理盐水将3-乙酰吲哚纸片沾湿，取待检菌落涂在纸片上，3min内出现蓝绿色为阳性反应。
5.β-内酰胺酶试验：用无菌蒸馏水将Nitrocefin纸片沾湿，取MC菌落涂在纸片上，5min内纸片变红色者判为B内酰胺酶阳性。
6.药敏试验：根据美国临床实验室标准化委员会2007年版标准，采用琼脂平皿二倍稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），用多点接种仪定量种菌。
二、结果
1.氧化酶试验：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均为阳性，79株不动杆菌氧化酶为阴性。
2.DNA酶试验：114株MC、8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌、3株博德特菌氧化酶均为阳性，79株不动杆菌DNA酶均为阴性。卡他莫拉菌对DNA酶的敏感性为100%，特异性为100% 。
3.乙酰酯酶试验：8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、12株莫拉菌亚属、3株博德特菌乙酰酯酶均为阴性，79株不动杆菌中乙酰酯酶阳性63株（占79.7% ），114株卡他莫拉菌乙酰酯酶全为阳性。卡他莫拉菌对乙酰酯酶的敏感性为100% ，特异性为77.7% 。但与近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属）比较特异性为100% 。
4.β-内酰胺酶：114株MC中B内酰胺酶阳性107株，12株莫拉菌亚属β-内酰胺酶阳性3株，8株淋病奈瑟菌、2株脑膜炎奈瑟菌、76株奈瑟菌、3株博德特菌β-内酰胺酶均为阴性。
三、讨论
MC与许多严重感染性疾病有关，但由该菌引起的感染发病率一直难以估计。因为，MC生长较缓慢，在不含血的培养基（营养琼脂、MH琼脂、脑心琼脂）上生长不良，菌落及菌体形态与许多近缘菌相似，分离及鉴定较为困难。为此，提高MC分离率已成为临床诊断和治疗MC感染所急需。我们采用3-乙酰吲哚纸片法检测MC产生的乙酰酯酶快速鉴定MC，此法操作简便，易于判断，敏感性为100% ，和近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属）比较特异性为100% ，与DNA酶试验及生化鉴定结果的相关性比较均为100% 。虽然不动杆菌的乙酰酯酶阳性率高达79.7% ，但是不动杆菌的氧化酶阴性，DNA酶试验阴性，在普通琼脂及中国蓝琼脂上生长良好，且菌落较MC湿润和光滑，稍加注意不难区别。
对114株MC的β-内酰胺酶检测结果分析表明，其阳性率高达93.0%，应引起临床医生的重视。哌拉西林/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦及亚胺培南/西司他丁对β-内酰胺酶阳性MC有很好的抗菌活性。在MC感染的治疗中，应选用含β-内酰胺酶抑制剂的复方制剂或用对p内酰胺酶头孢菌素进行治疗。MC的近缘菌（淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、奈瑟菌属、莫拉菌亚属等）中，β-内酰胺酶的阳性率非常低，因此，β-内酰胺酶试验也可作为MC与近缘菌的辅助试验。
参考文献：
[1]李光辉.卡他布兰汉菌研究现状.国外医学微生物学分册，199518：20.
[2]缪东幸.小儿呼吸道卡他布兰汉氏球菌感染.国外医学儿科学分册。1994，21：1-4.
[3]杨秀华。刘小兰，尚彦，等.乙酰吲噪纸片法快速鉴定卡他莫拉菌.中华医学检验杂志，1999，2 ：152.153.
[4]中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程.第2版.南京：东南大学出版社，1997.470-489.