【摘 要】
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目的:敲除大肠杆菌DH5ct中与葡萄糖磷酸化转运相关的ptsG、ptsM基因,考察缺陷株生长特性及其可能的应用.方法:PCR扩增靶基因,构建两翼带有靶基因序列并嵌合抗药基因标记的线
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目的:敲除大肠杆菌DH5ct中与葡萄糖磷酸化转运相关的ptsG、ptsM基因,考察缺陷株生长特性及其可能的应用.方法:PCR扩增靶基因,构建两翼带有靶基因序列并嵌合抗药基因标记的线性片段,利用Red同源重组技术敲除靶基因.结果:成功敲除了大肠杆菌DH5a的puG和ptsM基因;在含有葡萄糖的LB培养基中,DH5α△ptsG最高菌密度是亲本的2.8倍,添加吡咯喹啉醌或导入其生物合成基因后能够产酸;DH5α△ptsM最高菌密度是亲本的4/10,有明显的产酸现象.结论:DH5α△ptsG可用于大肠杆菌高密度发酵和吡咯喹啉醌生物合成基因缺陷株筛选.
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