为建立猪伪狂犬病病毒（PRV）疫苗免疫抗体与病毒感染抗体鉴别诊断方法,分别以PRV变异毒株的gE或gB重组蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）筛选所需单克隆抗体,获得6株抗PRV gE蛋白的单抗（3E6、7E1、7C5、10C3、15C1、14C1）和6株抗PRV gB蛋白的单抗（1C1、5D2、2F11、5G8、10C7、8H5）。IPMA检测结果显示,gE蛋白单抗能识别PRV变异毒株,但不识别疫苗株;而gB蛋白单抗可同时识别PRV变异毒株和疫苗株。gE单抗10C3和gB单抗10C7的ELISA效价和IPMA效价均分别达1∶5×10^5.0和1∶8×10^3.0以上。所筛选出的单抗均不与猪圆环病毒2型（PCV2）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）、流行性乙型脑炎病毒（JEV）等其他常见病毒发生交叉反应。gE蛋白和gB蛋白的表达及单抗的制备为PRV感染抗体与疫苗免疫抗体鉴别诊断（DIVA）试纸的研发奠定基础。