表达西尼罗病毒E蛋白重组腺病毒的构建及鉴定

来源 :中国预防兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dxlwwh

【摘要】

：

为构建表达西尼罗病毒（WNV）E蛋白的重组腺病毒，本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中，经PmeI酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大

【作者】

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张翠云赵晶陈韬孙恩成刘霓红杨涛徐青元王文世魏

【机构】

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湖南农业大学动物医学学院,中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室

【出处】

：

中国预防兽医学报

【发表日期】

：

2013年4期

【关键词】

：

西尼罗病毒 E蛋白重组腺病毒 West Nile virus E protein recombinant adenovirus

【基金项目】

：

国家863项目（2011AAl0A212）,黑龙江省自然科学基金（ZJN-0602.01）,兽医生物技术国家重点实验室基金（SKLVBP201018、SKLVBP2012101

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为构建表达西尼罗病毒（WNV）E蛋白的重组腺病毒，本实验将WNV的E基因克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中，经PmeI酶切线性化后电转化于含有人5型缺陷腺病毒的骨架的BJ5183感受态大肠杆菌中进行同源重组。构建重组质粒pAd．WNV-E；将其经PacI酶切线性化后通过脂质体介导转染于人胚肾细胞Ad-293细胞，制备重组腺病毒rAd-WNV-E；经western blot以及间接免疫荧光鉴定表明WNVE蛋白在Ad．293细胞中获得有效表达。病毒滴度测定试验结果显示，该重组腺病毒与野毒型腺病毒复

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