【摘 要】
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Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒(CSFV)复制密切相关的细胞分子伴侣,为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化,本研究以猪Jiv基因(DNAJC14)为参考序列,建立了检测猪分子伴侣Jiv
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院; 省部共建国家重点实验室培育基地青海省高原放牧家畜营养与生态重点实验室;
【基金项目】
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西北农林科技大学基本科研业务费(QN2011109、QN2012018);陕西省13115科技创新工程重大科技专项(2010ZDKG-71);青海省高原放牧家畜营养与生态重点实验室开放课题
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Jiv蛋白是一种与猪瘟病毒(CSFV)复制密切相关的细胞分子伴侣,为检测CSFV感染细胞内分子伴侣Jiv基因表达变化,本研究以猪Jiv基因(DNAJC14)为参考序列,建立了检测猪分子伴侣Jiv基因的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法。结果显示,所建方法的标准曲线相关系数为0.999,扩增效率为103.4%,在101~107拷贝数范围内具有较好的线性关系;对Jiv基因最低可检测到10拷贝,该方法的批内变异系数和批间变异系数均在0.5%以下,具有较高的敏感性和重复性。应用建立的方法对猪多种组织及猪源传代细胞中Jiv基因的表达进行检测,结果显示Jiv基因在所检测的组织和细胞中均有表达,表明所建方法可以用于Jiv基因的检测;同时对CSFV感染猪和阴性猪脾脏中的Jiv基因表达水平进行检测,统计发现CSFV感染猪脾脏中的Jiv基因表达水平显著上调,提示Jiv基因的表达在CSFV复制中发挥着一定的作用。本研究建立的检测猪Jiv基因的荧光定量RT-PCR方法为进一步明确Jiv蛋白在CSFV致病中的作用提供方法支持。
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