【摘 要】
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目的 探究芪珍胶囊对人结肠癌细胞HCT116及裸鼠移植瘤模型的作用及机制.方法 HCT116细胞给予芪珍胶囊进行干预,采用MTT法和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况;采用Western
【机 构】
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浙江中医药大学,浙江杭州 310053
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目的 探究芪珍胶囊对人结肠癌细胞HCT116及裸鼠移植瘤模型的作用及机制.方法 HCT116细胞给予芪珍胶囊进行干预,采用MTT法和流式细胞术检测细胞存活率和凋亡情况;采用Western blotting法考察芪珍胶囊对聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Caspase-9、剪切型 Caspase-9(cleaved Caspase-9)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、磷酸化 mTOR(p-mTOR)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、p-AMPK、细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellular signal regulated kinase,ERK)、p-ERK、p38和 p-p38蛋白表达的影响;采用 qRT-PCR 法检测芪珍胶囊对程序性死亡分子配体-1(programmed death ligand 1,PD-L1)mRNA表达的影响.建立结肠癌裸鼠移植瘤模型,考察芪珍胶囊对裸鼠体质量、瘤体积和瘤质量的影响;采用ELISA法检测各组裸鼠血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β水平;采用qRT-PCR法检测各组裸鼠肿瘤组织核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、TNF-α、IL-6、CD68、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和PD-L1 mRNA表达;采用Western blotting法考察各组裸鼠肿瘤组织PD-L1蛋白表达.以γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)诱导HCT116细胞,考察芪珍胶囊对细胞存活率及PD-L1蛋白表达的影响.结果 芪珍胶囊显著抑制HCT116细胞存活率(P＜0.01、0.001),显著促进细胞凋亡(P＜0.01、0.001),显著下调细胞中 Caspase-9、Caspase-3和 Bcl-2蛋白表达水平(P＜0.05、0.01),显著上调细胞中 cleaved Caspase-9、cleaved PARP、p-mTOR/mTOR、p-AMPK/AMPK、p-ERK/ERK 和 p-p38/p38蛋白表达水平(P＜0.05、0.01、0.001),显著下调细胞中 PD-Ll mRNA表达水平(P＜0.05).结肠癌裸鼠移植瘤模型中,芪珍胶囊显著抑制移植瘤生长(P＜0.05、0.01),降低氟尿嘧啶导致的裸鼠体质量减轻,显著降低血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P＜0.05、0.01、0.001),显著降低肿瘤组织中NFκB TNF-α、IL-6、CD68、MCP-1、iNOS和PD-L1 mRNA表达水平(P＜0.05),显著降低肿瘤组织中PD-L1蛋白表达水平(P＜0.01).芪珍胶囊显著抑制IFN-γ 诱导的HCT116细胞中PD-L1蛋白表达水平(P＜0.001).结论 芪珍胶囊能够通过诱导细胞凋亡、抑制炎性反应及PD-L1表达等途径抑制结肠癌的发生发展,可能是一种潜在的免疫检查点抑制剂.
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