【摘 要】
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构建人胰岛素原突变体GIRR(A21Asn→Gly,B17Leu→Ile,B31Arg,B32Arg)基因的原核融合表达载体并进行表达和纯化,进一步对其性质进行研究.将人胰岛素原突变体基因重组到pTXB1融
【机 构】
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山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,太原,030001协和医科大学基础医学研究所,北京,100730;
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构建人胰岛素原突变体GIRR(A21Asn→Gly,B17Leu→Ile,B31Arg,B32Arg)基因的原核融合表达载体并进行表达和纯化,进一步对其性质进行研究.将人胰岛素原突变体基因重组到pTXB1融合表达载体上,在E.coli BL21(DE3)中得到高效表达.表达产物经几丁质亲和柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶B的酶促转化等步骤,得到纯的人胰岛素突变体GIRR,其纯度经HPLC鉴定达到95%,氨基酸组成和设计相符,其受体结合活性是猪胰岛素的105%,生物活性为26.8IU/mg.其血浆半衰期为20分钟,比标准猪胰岛素提高3倍多.结果提示本突变体具有更长的半衰期,为长效胰岛素的制备提供了新的思路.
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