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【摘 要】 建立了标准菌株的菌落总数的不确定度分析，表征了测量结果可疑程度，评定了由重复性测量的分散性引起的不确定度总量。本实验是取对数后用常规的贝塞尔方法进行计算。
【关键词】 标准菌株；菌落总数；平板计数；不确定度评定
1 材料与方法
1.1标准依据（检验方法）：
《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》GB4789.2-2010
1.2仪器名称：①电热恒温培养箱
②菌落计数器
③压力蒸汽灭菌器
1.3样品情况：由权威部门提供的标准菌株。
1.4检验过程：
1.4.1取样（本实验共做3个稀释度）：
1.用1.1ml缓冲液（复溶液）溶解白色球状物，即为测试样品原液；
2.取1ml样品原液加到9ml生理盐水中，样液为10倍稀释液——稀释度（1：10）；
3.取1ml（10倍稀释液）加到9ml生理盐水中，样液为100倍稀释液——稀释度（1：100）；
4.取1ml（100倍稀释液）加到9ml生理盐水中，样液为1000倍稀释液——稀释度（1：1000）。
分别取3个稀释倍数的样液1ml，每一稀释度共做9个培养皿，将样液分别加到培养皿中，泼入培养基，进行培养。
1.4.2样液培养：培养皿在37℃环境培养24h。
1.5数学模型：
1.6不确定来源
菌落总数的不确定度来源主要包括：重复性（测试环境、培养温度、结果修约、样品的均匀性、取样重复性、人员的计数），培养条件（培养时间允差、培养湿度的允差），取样（稀释体积、取样体积）等[1]。
2 结果与讨论
2.1菌落总数的结果数据
本实验由实验室内同一人员在同一环境下取均匀的样液、在同一温度下培养的结果，结果见表1。从数据上看，由于测量结果发散性较大，这也是微生物测量中的特点。因此测量过程中的其他不确定度来源均可忽略不计。
同一稀释度重复测量9次，结果选取菌落总数在30～300之间的平板作为菌落总数的测定数据。本实验取稀释度为（1：100）作为计数数据。
2.2不确定度的评定
由于重复测量结果中的最大值和最小值相差较大，故不能用常规的标准偏差的方法计算不确定的值，通常是取对数以后再用常规的贝塞尔方法进行计算。
2.2.1合成不确定度
测量结果为9次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为：
2.2.2扩展不确定度
由于置信概率P=95%[2]，自由度v=8，查得t分布表可得k=1.860。则扩展不确定度为：
2.2.3菌落总数的不确定度报告
3 小结
3.1目前，国际上统一使用的检测和校准实验能力的通用要求是ISO/IEC17025-2005，在内容和技术要求方面强化了评定测量不确定度要求[3]，由于微生物测量结果的特殊性，所以其测量结果的不确定度表示也与其他专业不同；
3.2如果在空白试验中发现有菌落生长情况，则認为实验条件不符合规定要求[4]，所以实验应重新进行，如继续评定不确定度，则评定无效；
3.3在识别不确定度来源后，对不确定度各个分量作一个预估算是必要的，对那些比最大分量的三分之一还小的分量可不必评估[5]，除非分量较多。本实验重复性测量结果占的分量最大，其他分量小于三分之一，且数量不多，所以其他分量均未评估。
参考文献：
[1]李玉玲.宋莉莉.食品微生物菌落总数检验中不确定度的评定[J].中国卫生检验杂志，2005，15（7）：880，896；
[2]CNAS-CL07-2006.测量不确定度评估和报告通用要求[S]；
[3]万颍.朱茂英.食品菌落总数测量不确定度评定[J].阜阳师范学院学报，2006，23（2）：48～49；
[4]赵婷.酱卤肉制品中菌落总数测量结果不确定度评定[J].计量与测试技术，2010，37（1）55～56；
[5]CNAS-CL05-2011.测量不确定度要求的实施指南[S]。
作者简介：韩凤霞（1979-），女，工程师，硕士研究生，研究方向：食品质量安全检测分析
【关键词】 标准菌株；菌落总数；平板计数；不确定度评定
1 材料与方法
1.1标准依据（检验方法）：
《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》GB4789.2-2010
1.2仪器名称：①电热恒温培养箱
②菌落计数器
③压力蒸汽灭菌器
1.3样品情况：由权威部门提供的标准菌株。
1.4检验过程：
1.4.1取样（本实验共做3个稀释度）：
1.用1.1ml缓冲液（复溶液）溶解白色球状物，即为测试样品原液；
2.取1ml样品原液加到9ml生理盐水中，样液为10倍稀释液——稀释度（1：10）；
3.取1ml（10倍稀释液）加到9ml生理盐水中，样液为100倍稀释液——稀释度（1：100）；
4.取1ml（100倍稀释液）加到9ml生理盐水中，样液为1000倍稀释液——稀释度（1：1000）。
分别取3个稀释倍数的样液1ml，每一稀释度共做9个培养皿，将样液分别加到培养皿中，泼入培养基，进行培养。
1.4.2样液培养：培养皿在37℃环境培养24h。
1.5数学模型：
1.6不确定来源
菌落总数的不确定度来源主要包括：重复性（测试环境、培养温度、结果修约、样品的均匀性、取样重复性、人员的计数），培养条件（培养时间允差、培养湿度的允差），取样（稀释体积、取样体积）等[1]。
2 结果与讨论
2.1菌落总数的结果数据
本实验由实验室内同一人员在同一环境下取均匀的样液、在同一温度下培养的结果，结果见表1。从数据上看，由于测量结果发散性较大，这也是微生物测量中的特点。因此测量过程中的其他不确定度来源均可忽略不计。
同一稀释度重复测量9次，结果选取菌落总数在30～300之间的平板作为菌落总数的测定数据。本实验取稀释度为（1：100）作为计数数据。
2.2不确定度的评定
由于重复测量结果中的最大值和最小值相差较大，故不能用常规的标准偏差的方法计算不确定的值，通常是取对数以后再用常规的贝塞尔方法进行计算。
2.2.1合成不确定度
测量结果为9次重复测量的平均值，故平均值的标准不确定度为：
2.2.2扩展不确定度
由于置信概率P=95%[2]，自由度v=8，查得t分布表可得k=1.860。则扩展不确定度为：
2.2.3菌落总数的不确定度报告
3 小结
3.1目前，国际上统一使用的检测和校准实验能力的通用要求是ISO/IEC17025-2005，在内容和技术要求方面强化了评定测量不确定度要求[3]，由于微生物测量结果的特殊性，所以其测量结果的不确定度表示也与其他专业不同；
3.2如果在空白试验中发现有菌落生长情况，则認为实验条件不符合规定要求[4]，所以实验应重新进行，如继续评定不确定度，则评定无效；
3.3在识别不确定度来源后，对不确定度各个分量作一个预估算是必要的，对那些比最大分量的三分之一还小的分量可不必评估[5]，除非分量较多。本实验重复性测量结果占的分量最大，其他分量小于三分之一，且数量不多，所以其他分量均未评估。
参考文献：
[1]李玉玲.宋莉莉.食品微生物菌落总数检验中不确定度的评定[J].中国卫生检验杂志，2005，15（7）：880，896；
[2]CNAS-CL07-2006.测量不确定度评估和报告通用要求[S]；
[3]万颍.朱茂英.食品菌落总数测量不确定度评定[J].阜阳师范学院学报，2006，23（2）：48～49；
[4]赵婷.酱卤肉制品中菌落总数测量结果不确定度评定[J].计量与测试技术，2010，37（1）55～56；
[5]CNAS-CL05-2011.测量不确定度要求的实施指南[S]。
作者简介：韩凤霞（1979-），女，工程师，硕士研究生，研究方向：食品质量安全检测分析