目的研究凋亡诱导因子(AIF)在顺铂诱导肾小管上皮细胞HK-2凋亡中的作用。方法采用Westernblot法和荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)分别检测不同浓度(0、25、50、100、150、200p.mol/L)和不同时问(0、3、6、9、12h)顺铂作用下,体外培养HK-2细胞中AIF蛋白和mRNA表达。采用免疫荧光染色检测顺铂作用下HK.2细胞AIF表达分布。采用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞仪检测泛caspase抑制剂和AIF靶向siRNA对顺铂作用下HK-2细胞凋亡的抑制作用。结果经不同浓度和不同时间顺铂的作用,HK-2细胞胞质AIF(cAIF)、胞核AIF(nAIF)及其mRNA表达均有不同程度增加。从25μmol/L顺铂作用12h和50μmol/L顺铂作用3h起,cAIF表达均有升高,分别是对照组的2.3倍(P〈0.05)和1.7倍(P〈0.01)。nAIF表达呈一定浓度和时间依赖性,在150μmol/L顺铂作用12h和50p,mol/L顺铂作用9h达到高峰,分别为25μmol/L组的4.3倍(P〈0.005)和3h组的3.7倍(P〈0.05),nAIF表达与多聚腺苷二磷酸一核糖聚合酶1(PARP-1)剪切片段(cl—PARP)的表达趋势基本一致。AIFmRNA表达在50μmol/L顺铂作用0~9h区间呈梯度增加。免疫荧光染色结果显示,经顺铂作用后,部分HK-2细胞发生AIF核转位。泛caspase抑制剂Z.VAD-FMK和AIFsiRNA对顺铂诱导细胞凋亡的抑制率分别为60,1%和39.2%,两者联合应用的抑制作用更加明显。结论AIF蛋白激活和核转位以及AIFmRNA表达的增加介导了顺铂诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,可能为防治顺铂诱导的肾毒性作用提供了新靶点。
凋亡诱导因子介导顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡
【摘 要】
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目的研究凋亡诱导因子(AIF)在顺铂诱导肾小管上皮细胞HK-2凋亡中的作用。方法采用Westernblot法和荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)分别检测不同浓度(0、25、50、100、150、200p.mol/L)和不同时问(0、3、6、9、12h)顺铂作用下,体外培养HK-2细胞中AIF蛋白和mRNA表达。采用免疫荧光染色检测顺铂作用下HK.2细胞AIF表达分布。采用原位末端标记(TUNEL)
【机 构】
:
复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学肿瘤医院化疗科,复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学上海医学院病理学系,200032,复旦大学上海医学院病理学系,200032
【发表日期】
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2010年32期
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