两性霉素B对人THP-1细胞产生肿瘤坏死因子α、白细胞介素8及p38MAPK活化的影响

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目的

探讨两性霉素B对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞系分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素8(IL-8)以及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)活化的影响。

方法

将THP-1细胞分为空白对照组、两性霉素B组(分别加入2、4、8 mg/L两性霉素B处理);阳性对照组(用100 μg/L β葡聚糖或者100 mg/L脂多糖处理)。实时荧光定量PCR分析不同刺激物和THP-1细胞作用一定时间后TNF-α、IL-8 mRNA表达水平。酶联免疫吸附试验检测8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h后上清液中TNF-α分泌量。Western印迹检测8 mg/L两性霉素B作用THP-1细胞后p38MAPK和磷酸化p38MAPK的水平。

结果

2、4、8 mg/L两性霉素B刺激6 h,TNF-α mRNA水平分别为7.55 ± 1.17、19.47 ± 2.91、57.22 ± 0.65,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P < 0.01、0.001、0.001)。IL-8 mRNA水平分别为2.98 ± 0.04、5.22 ± 1.35、11.82 ± 1.66,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P < 0.01、0.001、0.001)。8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞1、3、6 h后TNF-α mRNA水平分别为8.61 ± 0.30、10.75 ± 0.08、56.98 ± 2.43,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05、0.01、0.001)。IL-8 mRNA水平分别为2.63 ± 0.28、5.35 ± 0.98、11.73 ± 1.18,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05、0.01、0.001)。8 mg/L两性霉素B刺激THP-1细胞24 h上清液中TNF-α蛋白水平为(4 039.06 ± 223.87)ng/L,与空白对照组比较差异有统计学意义(P < 0.001)。

结论

两性霉素B体外可促进人THP-1细胞p38MAPK蛋白磷酸化及TNF-α和IL-8分泌,具有免疫调节作用。

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