【摘 要】
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目的:构建携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体。方法:采用PCR技术,从质粒中扩增基因cbfa1和satb2,经TA克隆、酶切筛选后,对阳性重组子进行商业测序鉴定。将测序正确
【机 构】
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山东大学口腔医学院牙周科,山东大学口腔医学院山东省口腔生物医学重点实验室,
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目的:构建携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体。方法:采用PCR技术,从质粒中扩增基因cbfa1和satb2,经TA克隆、酶切筛选后,对阳性重组子进行商业测序鉴定。将测序正确的cbfa1和satb2分别插入pIRES上、下游的相应酶切位点中,构建pIRES-cbfa1-satb2。然后通过双酶切,得到cbfa1-Ires-satb2片段,将其插到含有neo/kana基因的慢病毒载体pLentinTrident1-CMV的相应酶切位点上,构建慢病毒真核表达载体pLentinTrident1-CMV-cbfa1-Ires-satb2。结果:通过PCR技术成功扩增了cbfa1和satb2基因,借助中间载体pIRES中的内部核糖体进入位点,将cbfa1和satb2同时连到了慢病毒载体pLentinTrident1-CMV上,经PCR、酶切及测序验证,质粒构建成功。结论:本实验成功构建了携带cbfa1和satb2双基因的慢病毒真核表达载体,为进一步研究2种基因的功能奠定了基础。
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