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摘 要：目的 建立气相色谱（GC）测定托拉塞米中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯5种有机残留量的测定方法。方法 采用直接进样毛细管气相色谱法，色谱柱为：DB-624色谱柱（30m×530 m×3.0 m），载气为氮气，FID检测器，DMSO为溶剂。结果 此色谱条件下被测物均能得到很好的分离，峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，回收率良好。结论：方法简便、灵敏，结果准确、可靠，适用于托拉塞米中有机残留量的检测。
关键词：托拉塞米 有机残留量 毛细管气相色谱法
托拉塞米是新一代高效髓袢利尿剂，于1993年在德国上市，次年在美国上市。托拉塞米有利尿、排Na+和排C1-作用，但不显著改变肾小球滤过率、肾血浆流量和酸碱平衡。作用于髓袢升支粗段，干扰管腔细胞膜的Na+、K+、2C1-同向转运体系，抑制C1-和Na+的重吸收，使管腔液NaCl的浓度增高，渗透压增大，肾髓质间液的NaCl减少，渗透压梯度降低，从而干扰尿的浓缩过程，使尿Na+，Cl-和水的排泄增加。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该5种有机溶剂均有残留限量。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了托拉塞米原料药中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器 Agilent 7890A
2.试药 托拉塞米原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件
DB-624（30m×530μm×3.0m）毛细管柱； 程序升温，起始40℃，保持10min，以每分钟10℃升至100℃，保持2min，再以每分钟40℃升至220℃，保持3min； FID检测器，检测器温度250℃；进样口温度：200℃；分流比：5：1； 以DMSO为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
对照品溶液：精密称取甲醇0.3g，乙醇0.5g二氯甲烷0.06g，乙酸乙酯0.5g和甲苯0.089g，置50ml容量瓶中，加DMSO稀释并定容到刻度，摇匀；精密量取5ml，置100ml容量瓶中，加DMSO稀释并定容到刻度，摇匀。
供试品溶液：取供试品0.1g，精密称定，加1mlDMSO溶解，摇匀。
3.系统适用性溶液
取DMSO空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品 溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈5.9min，乙醇tR≈8.0min，二氯甲烷tR≈10.8min，乙酸乙酯tR≈14.4min，甲苯tR≈19.3min。结果表明，各被测溶剂之间分离良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯适量，精密称定，用DMSO稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述5种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.0～360， 50.0～600，6.0～72.0，50.0～600，8.9～106.8。回归方程及相关系数依次是：
Y1 = 1206.3X1 - 3.8843，r1=0.9998；
Y2 =1502.9X2 - 13.1780，r2=0.9999；
Y3= 1577.4X3 - 0.9426，r3=0.9999；
Y4= 5350.2X4 - 12.9950，r4=0.9997；
Y5 =7191.7X5 - 2.2386， r5=0.9999。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液，连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为甲醇3.56% ，乙醇3.72%，二氯甲烷2.96%，乙酸乙酯2.82%，甲苯3.76%。
6.最低检测限
取对照品溶液用DMSO逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇，乙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，甲苯的最低检测限依次是1.2，9.6，3.8，1.2，0.5。
7.回收率实验
取甲醇0.30g，乙醇0.5g，二氯甲烷0.06g，乙酸乙酯0.5g，甲苯 0.89，精密称定，置已加少许DMSO的10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇3000μg，乙醇5000μg，二氯甲烷600μg，乙酸乙酯5000μg，甲苯890μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的托拉塞米0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为：103.7%，105.1%，104.4%，102.2%，101.4%，RSD在2.42%～4.19%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定，3批原料药中检测出甲醇分别为0.001%，0.001%，0.001%，检测出乙醇分别为0.2%，0.2%，0.2%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便、灵敏、精密度、回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于托拉塞米有机溶剂残留量的检测。
关键词：托拉塞米 有机残留量 毛细管气相色谱法
托拉塞米是新一代高效髓袢利尿剂，于1993年在德国上市，次年在美国上市。托拉塞米有利尿、排Na+和排C1-作用，但不显著改变肾小球滤过率、肾血浆流量和酸碱平衡。作用于髓袢升支粗段，干扰管腔细胞膜的Na+、K+、2C1-同向转运体系，抑制C1-和Na+的重吸收，使管腔液NaCl的浓度增高，渗透压增大，肾髓质间液的NaCl减少，渗透压梯度降低，从而干扰尿的浓缩过程，使尿Na+，Cl-和水的排泄增加。由于在原药合成过程中使用了有机溶剂甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯，在成品中可能会有一定量的残留。按中国药典2010年版（附录Ⅷ）规定，该5种有机溶剂均有残留限量。笔者参考了有关文献采用直接进样毛细管气相色谱法，测定了托拉塞米原料药中甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯的残留量。方法简便、灵敏，结果准确可靠。
一、仪器与试药
1.仪器 Agilent 7890A
2.试药 托拉塞米原料药3批
二、方法与结果
1.色谱条件
DB-624（30m×530μm×3.0m）毛细管柱； 程序升温，起始40℃，保持10min，以每分钟10℃升至100℃，保持2min，再以每分钟40℃升至220℃，保持3min； FID检测器，检测器温度250℃；进样口温度：200℃；分流比：5：1； 以DMSO为溶剂，直接进样1μl。
2.供试品溶液与对照品溶液的制备
对照品溶液：精密称取甲醇0.3g，乙醇0.5g二氯甲烷0.06g，乙酸乙酯0.5g和甲苯0.089g，置50ml容量瓶中，加DMSO稀释并定容到刻度，摇匀；精密量取5ml，置100ml容量瓶中，加DMSO稀释并定容到刻度，摇匀。
供试品溶液：取供试品0.1g，精密称定，加1mlDMSO溶解，摇匀。
3.系统适用性溶液
取DMSO空白溶剂1μl进行测定，结果表明溶剂无干扰。取对照品 溶液1μl进行测定，记录色谱图，甲醇tR≈5.9min，乙醇tR≈8.0min，二氯甲烷tR≈10.8min，乙酸乙酯tR≈14.4min，甲苯tR≈19.3min。结果表明，各被测溶剂之间分离良好。
4.线性范围及标准曲线
取甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯适量，精密称定，用DMSO稀释制成一系列溶液，照上述色谱条件分别进行测定，以被测物峰面积为纵坐标，以被测物的质量浓度为横坐标进行线性回归。上述5种被测物的线性范围（μg/ml）依次是：30.0～360， 50.0～600，6.0～72.0，50.0～600，8.9～106.8。回归方程及相关系数依次是：
Y1 = 1206.3X1 - 3.8843，r1=0.9998；
Y2 =1502.9X2 - 13.1780，r2=0.9999；
Y3= 1577.4X3 - 0.9426，r3=0.9999；
Y4= 5350.2X4 - 12.9950，r4=0.9997；
Y5 =7191.7X5 - 2.2386， r5=0.9999。
5.精密度实验
在上述色谱条件下，取对照品溶液，连续进样6次，计算对照品溶液中被测溶剂的RSD依次为甲醇3.56% ，乙醇3.72%，二氯甲烷2.96%，乙酸乙酯2.82%，甲苯3.76%。
6.最低检测限
取对照品溶液用DMSO逐步稀释，依据S/N≥3，确定甲醇，乙醇，二氯甲烷，乙酸乙酯，甲苯的最低检测限依次是1.2，9.6，3.8，1.2，0.5。
7.回收率实验
取甲醇0.30g，乙醇0.5g，二氯甲烷0.06g，乙酸乙酯0.5g，甲苯 0.89，精密称定，置已加少许DMSO的10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀。移取储备液 1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得每1ml中含甲醇3000μg，乙醇5000μg，二氯甲烷600μg，乙酸乙酯5000μg，甲苯890μg的混合溶液。
溶液1： 精密移取混合溶液0.8ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的80%溶液。
溶液2： 精密移取混合溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的100%溶液。
溶液3： 精密移取混合溶液1.2ml，置10ml容量瓶中，加DMSO至刻度，摇匀，即得对照品溶液的120%溶液。
取相同批次的托拉塞米0.1g，精密称定，平行9份，分别移取溶液1、溶液2和溶液3各1.0ml溶解，每3份加一种溶液，分别摇匀，即得9份供试品溶液。按外标法以峰面积计算回收率。回收率依次分别为：103.7%，105.1%，104.4%，102.2%，101.4%，RSD在2.42%～4.19%之间。
8.供试品的测定
照2.2 项下的方法制备供试品溶液与对照品溶液， 在上述色谱条件下测定，3批原料药中检测出甲醇分别为0.001%，0.001%，0.001%，检测出乙醇分别为0.2%，0.2%，0.2%，其他溶剂未检出。
三、讨论
本方法简便、灵敏、精密度、回收率符合中国药典2010年版的要求，因此本色谱方法适用于托拉塞米有机溶剂残留量的检测。