过表达外源ST3Gal Ⅰ增加MCF-7细胞与胞外基质粘附和侵袭能力

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:itliutao123
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为探讨过表达外源α2,3-唾液酸转移酶(ST3GalⅠ)对乳腺癌MCF-7细胞粘附和侵袭能力的影响,构建pEGFP-N1-ST3Gal I真核表达载体.采用GenEscortTMⅡ包裹后转染MCF-7细胞.MCF-7细胞为3组:未转染组(M)、转染空质粒组(P)和转染ST3Gal Ⅰ组(ST3);荧光显微镜观察融合蛋白EGFP-ST3Gal Ⅰ的表达.采用半定量RT-PCR、Western印迹法分析转染后MCF-7细胞ST3GalⅠ基因mRNA水平和蛋白表达水平;流式细胞术分析ST3GalⅠ下游产物细胞表面α2,3-唾液酸含量;采用细胞粘附实验及transwell小室检测转染前后细胞与基质胶Matrigel粘附、迁移和侵袭运动能力的变化.结果表明,荧光显微镜下P组细胞内绿色荧光呈弥散分布,而ST3组绿色荧光主要集中在细胞质中,RT-PCR与Western印迹也证实了外源ST3GalⅠ基因mRNA和蛋白表达均明显增加(P<0.05),其下游产物细胞表面α2,3-唾液酸含量明显增加(P<0.05);与M、P组相比,ST3组表现为粘附、迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05).利用转染技术可明显提高外源ST3GalⅠ在MCF-7细胞表达,明显增加MCF-7细胞与胞外基质(ECM)粘附、迁移和侵袭能力,可形成肿瘤入侵表型,将有望成为治疗乳腺癌转移的新靶点.
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