【摘 要】
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目的 探讨miR-124抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法 构建鞘氨醇激酶1(SPHK1) 3UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告基因实验检测miR-124对SPHK1 3UTR-荧光素酶活性的影
【机 构】
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南华大学附属第一医院肿瘤内科,衡阳,421001;南华大学附属第一医院病理科,衡阳,421001;南华大学肿瘤研究所;
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目的 探讨miR-124抑制胃癌细胞增殖和侵袭的机制.方法 构建鞘氨醇激酶1(SPHK1) 3UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告基因实验检测miR-124对SPHK1 3UTR-荧光素酶活性的影响.将miR-124模拟物转染胃癌细胞MGC-803,采用West blot检测SPHK1表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)和Transwell侵袭实验检测miR-124与SPHK1 siRNA对MGC-803细胞生长、侵袭转移能力的影响.结果 荧光素报告载体系统证实,SPHK1是miR-124直接调控的靶基因.West blot检测结果显示,miR-124可抑制SPHK1蛋白的表达.MTT法检测结果显示,转染12、24、48 h后,对照组的A值分别为0.316±0.010、0.429 ±0.002和0.517±0.007,miR-124模拟物组的A值分别为0.152±0.003、0.216±0.001和0.242±0.020,SPHK1 siRNA组的A值分别为0.167±0.006、0.286±0.011和0.311±0.040,miR-124模拟物组和SPHK1 siRNA组与对照组差异均有统计学意义(均P ＜0.05),且具有时间依赖性.Transwell侵袭实验显示,转染24h后,对照组、miR-124模拟物组和SPHK1 siRNA组的穿膜细胞数分别为(100.6±11.3)个、(47.8±6.6)个和(54.6±8.3)个,miR-124模拟物和SPHK1 siRNA能明显减缓MGC-803细胞的侵袭能力,与对照组差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 miR-124可通过靶向调控SPHK1的表达而抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力.
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