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摘 要：柴连口服液现标准检验项目中无柴胡鉴别项，无法证明柴连口服液中是否含有柴胡有效成分，为了确保药品真实可靠，笔者通过查阅文献，不断进行实验摸索，建立了适合柴连口服液的柴胡薄层鉴别检测方法。结果：建立的柴胡薄层鉴别检测方法其专属性、耐用性良好。结论：建立的新方法准确可靠，适用于柴连口服液质量控制。
关键词：柴胡；专属性；耐用性；薄层鉴别
柴连口服液解表宣肺，化湿和中，用于感冒属风寒、风寒挟湿症者，证见恶寒，发热、头痛、鼻塞。咳嗽、咽干、恶心等。其功效成分由麻黄、柴胡、广藿香、肉桂、连翘等组成。现登载《中国药典》的柴连口服液的质量标准中无柴胡鉴别项，为严格控制产品质量，确保药品真实性，有效提高治疗效果，本文建立了适合于柴连口服液的柴胡薄层鉴别检测方法。
1 材料
1.1 供试品
柴连口服液（本公司技术部提供样品 批号：样品1～样品10）
贮藏条件：密封，至阴凉处
1.2 对照品
柴胡对照药材（中国药品生物制品检定所 批号：120992-200504，规格：0.5g）
贮存条件：避光，密闭保存。使用条件：使用前无需干燥，可直接使用。
1.3 阴性空白样品
技术部提供阴性空白样品为按柴连口服液工艺生产不含柴胡药材的制备样品。
1.4 仪器与试药
1.4.1 仪器。超声波清洗机，电热恒温鼓风干燥箱，瑞士卡玛薄层点板机，瑞士卡玛薄层成像系统，METTLER电子天平，青岛海洋化工厂硅胶G板。
1.4.2 试药。乙醚、甲醇、正丁醇、氨水、三氯甲烷、对二甲基苯甲醛、硫酸、乙醇、乙酸乙酯等均为分析纯来源于合格的供应商。
2 方法研究
2.1 对照药材溶液和供试品溶液的制备
2.1.1 对照药材溶液的制备。取柴胡对照药材0.5g，加水20ml回流1小时，回流液滤过，以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，弃去氨试液，静置，分层后，取正丁醇蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。
2.1.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备与优化。供试品溶液制备：制备方法①：取本品10ml，加甲醇20ml，提取，取甲醇层，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。制备方法②：取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，20ml/次，弃去乙醚液，再以水饱和正丁醇提取3次……（同对照药材溶液制备中间过程），残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。阴性对照溶液制备：各取空白样品液10ml置分液漏斗中，与供试品溶液制备方法①与②同法制成不同阴性对照溶液。实验薄层色谱图显示供试品溶液与对照药材溶液荧光斑点明亮，表明方法②提取量较多，故应采用方法②作为柴连口服液中柴胡鉴别项的供试品溶液和阴性对照溶液提取方法。
2.2 展开剂溶液的制备与优化
制备方法①：三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下层溶液为展开剂。制备方法②：为乙酸乙酯-甲醇-水（8：2：1）。将供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液以相同点样量分别点于兩张硅胶G板上，并分别在展开剂①及展开剂②溶剂中展开，观察不同展开剂斑点显色情况。实验色谱图显示，以制备方法①为展开剂展开的供试品溶液与对照药材溶液色谱较方法②斑点显示清晰，分离较好。故选用展开剂①方法作为柴连口服液柴胡鉴别项的展开剂溶液。
2.3 显色剂溶液的制备与优化
制备方法①：2%对二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇（1→10）溶液。制备方法②：2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液。将同一供试液点样量、薄层板及展开剂溶液完全相同的两张板分别喷以不同显色剂溶液，观察不同显色剂溶液斑点的显色情况。实验色谱图显示，喷显色剂①溶液的色谱斑点较喷显色剂②溶液的色谱斑点显色更清晰，易于判定。固选用制备方法①溶液做为柴连口服液中柴胡鉴别项的显色剂。
2.4 方法小结
经过方法对比试验，拟定柴连口服液中柴胡鉴别方法如下：取柴胡对照药材0.5g，加水20ml回流1小时，回流液滤过，以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，弃去氨试液，静置，分层后，取正丁醇蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，20ml/次，弃去乙醚液，再以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，静置，分层后，弃去氨试液，取正丁醇蒸干，残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。吸取供试品溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下层溶液为展开剂，展开取出，晾干，喷以2%对二甲基苯甲酸硫酸乙醇液（1→10），置105℃干燥箱加热至斑点显色清晰。置紫外光（365nm）下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上，应显两个或两个以上相同颜色荧光斑点。
3 方法学验证
3.1 专属性结果
以不同样品的供试液，对照药材溶液及阴性对照溶液验证本方法，在相同位置上，供试品溶液与对照药材溶液呈两个或两个以上相同颜色荧光斑点，阴性对照溶液均无对应斑点，检测专属性强。
3.2 耐用性结果
通过在实验中对试剂厂家、提取次数及点样量的改变，以及对10批柴连口服液验证其柴胡鉴别项方法的耐用性，结果均成立。
4 结论
经过以上分析方法学验证表明，本方法适用于柴连口服液中柴胡成分的鉴别。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015.
[2]吴成立，王小龙，张培奇.双清口服液中桔梗、柴胡的薄层鉴别方法[J].河南中医药学刊，2000，3.
[3]李红卫，焦海胜，高莉，许建寅.复方柴胡口服液的薄层鉴别研究[J].中医药学刊，2005（9）：1706-1707.
[4]赖克道，刘元，李星宇，文志云.薄层色谱法定性鉴别小柴胡颗粒中的柴胡、甘草[J].广西医学，2009（6）：886-887.
[5]薛吉利，丁红，杜艳，孙川.小柴胡片中柴胡和党参的薄层鉴别[J].中国药物与临床，2012（11）：1445-1446.
关键词：柴胡；专属性；耐用性；薄层鉴别
柴连口服液解表宣肺，化湿和中，用于感冒属风寒、风寒挟湿症者，证见恶寒，发热、头痛、鼻塞。咳嗽、咽干、恶心等。其功效成分由麻黄、柴胡、广藿香、肉桂、连翘等组成。现登载《中国药典》的柴连口服液的质量标准中无柴胡鉴别项，为严格控制产品质量，确保药品真实性，有效提高治疗效果，本文建立了适合于柴连口服液的柴胡薄层鉴别检测方法。
1 材料
1.1 供试品
柴连口服液（本公司技术部提供样品 批号：样品1～样品10）
贮藏条件：密封，至阴凉处
1.2 对照品
柴胡对照药材（中国药品生物制品检定所 批号：120992-200504，规格：0.5g）
贮存条件：避光，密闭保存。使用条件：使用前无需干燥，可直接使用。
1.3 阴性空白样品
技术部提供阴性空白样品为按柴连口服液工艺生产不含柴胡药材的制备样品。
1.4 仪器与试药
1.4.1 仪器。超声波清洗机，电热恒温鼓风干燥箱，瑞士卡玛薄层点板机，瑞士卡玛薄层成像系统，METTLER电子天平，青岛海洋化工厂硅胶G板。
1.4.2 试药。乙醚、甲醇、正丁醇、氨水、三氯甲烷、对二甲基苯甲醛、硫酸、乙醇、乙酸乙酯等均为分析纯来源于合格的供应商。
2 方法研究
2.1 对照药材溶液和供试品溶液的制备
2.1.1 对照药材溶液的制备。取柴胡对照药材0.5g，加水20ml回流1小时，回流液滤过，以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，弃去氨试液，静置，分层后，取正丁醇蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。
2.1.2 供试品溶液及阴性对照溶液的制备与优化。供试品溶液制备：制备方法①：取本品10ml，加甲醇20ml，提取，取甲醇层，超声处理10分钟，滤过，滤液浓缩至5ml，作为供试品溶液。制备方法②：取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，20ml/次，弃去乙醚液，再以水饱和正丁醇提取3次……（同对照药材溶液制备中间过程），残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。阴性对照溶液制备：各取空白样品液10ml置分液漏斗中，与供试品溶液制备方法①与②同法制成不同阴性对照溶液。实验薄层色谱图显示供试品溶液与对照药材溶液荧光斑点明亮，表明方法②提取量较多，故应采用方法②作为柴连口服液中柴胡鉴别项的供试品溶液和阴性对照溶液提取方法。
2.2 展开剂溶液的制备与优化
制备方法①：三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下层溶液为展开剂。制备方法②：为乙酸乙酯-甲醇-水（8：2：1）。将供试品溶液、对照药材溶液及阴性对照溶液以相同点样量分别点于兩张硅胶G板上，并分别在展开剂①及展开剂②溶剂中展开，观察不同展开剂斑点显色情况。实验色谱图显示，以制备方法①为展开剂展开的供试品溶液与对照药材溶液色谱较方法②斑点显示清晰，分离较好。故选用展开剂①方法作为柴连口服液柴胡鉴别项的展开剂溶液。
2.3 显色剂溶液的制备与优化
制备方法①：2%对二甲氨基苯甲醛硫酸乙醇（1→10）溶液。制备方法②：2%对二甲氨基苯甲醛的40%硫酸溶液。将同一供试液点样量、薄层板及展开剂溶液完全相同的两张板分别喷以不同显色剂溶液，观察不同显色剂溶液斑点的显色情况。实验色谱图显示，喷显色剂①溶液的色谱斑点较喷显色剂②溶液的色谱斑点显色更清晰，易于判定。固选用制备方法①溶液做为柴连口服液中柴胡鉴别项的显色剂。
2.4 方法小结
经过方法对比试验，拟定柴连口服液中柴胡鉴别方法如下：取柴胡对照药材0.5g，加水20ml回流1小时，回流液滤过，以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，弃去氨试液，静置，分层后，取正丁醇蒸干，残渣加2ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。取本品10ml置分液漏斗中，用乙醚振摇提取3次，20ml/次，弃去乙醚液，再以水饱和正丁醇提取3次，20ml/次，合并正丁醇液，加入等体积的氨试液，摇匀，静置，分层后，弃去氨试液，取正丁醇蒸干，残渣加5ml甲醇溶解，作为供试品溶液。吸取供试品溶液及对照品溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上。以三氯甲烷：甲醇：水（13：7：2）10℃以下的下层溶液为展开剂，展开取出，晾干，喷以2%对二甲基苯甲酸硫酸乙醇液（1→10），置105℃干燥箱加热至斑点显色清晰。置紫外光（365nm）下检视，供试品色谱在与对照药材色谱相应位置上，应显两个或两个以上相同颜色荧光斑点。
3 方法学验证
3.1 专属性结果
以不同样品的供试液，对照药材溶液及阴性对照溶液验证本方法，在相同位置上，供试品溶液与对照药材溶液呈两个或两个以上相同颜色荧光斑点，阴性对照溶液均无对应斑点，检测专属性强。
3.2 耐用性结果
通过在实验中对试剂厂家、提取次数及点样量的改变，以及对10批柴连口服液验证其柴胡鉴别项方法的耐用性，结果均成立。
4 结论
经过以上分析方法学验证表明，本方法适用于柴连口服液中柴胡成分的鉴别。
参考文献
[1]中华人民共和国药典（一部）.化学工业出版社，2015.
[2]吴成立，王小龙，张培奇.双清口服液中桔梗、柴胡的薄层鉴别方法[J].河南中医药学刊，2000，3.
[3]李红卫，焦海胜，高莉，许建寅.复方柴胡口服液的薄层鉴别研究[J].中医药学刊，2005（9）：1706-1707.
[4]赖克道，刘元，李星宇，文志云.薄层色谱法定性鉴别小柴胡颗粒中的柴胡、甘草[J].广西医学，2009（6）：886-887.
[5]薛吉利，丁红，杜艳，孙川.小柴胡片中柴胡和党参的薄层鉴别[J].中国药物与临床，2012（11）：1445-1446.