【摘 要】
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目的 研究北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK) 184位点脯氨酸(proline,P)突变为蛋氨酸(DL-methionine,M)对酶动力学及酶学性质的影响.方法 对北京棒杆菌AK家族同源
【机 构】
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小麦和玉米深加工国家工程实验室/吉林农业大学食品科学与工程学院,长春,130118
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目的 研究北京棒杆菌天冬氨酸激酶(aspartate kinase,AK) 184位点脯氨酸(proline,P)突变为蛋氨酸(DL-methionine,M)对酶动力学及酶学性质的影响.方法 对北京棒杆菌AK家族同源序列比对,选择出高度保守且远离底物结合位点的Pr0 184位点,对其进行饱和定点突变,成功构建突变体P184M.结果 动力学和酶学性质研究表明:P184M AK Vmax比WT(widetype)提高了5.06倍;n值为0.19,突变体由WT的正协同性变为负协同性,同时Km(mol/L)值增大;突变体AK最适pH为6.5,低于野生型最适pH 7.0;最适反应温度28℃,低于WT的30℃,适宜温度区间变窄;半衰期由WT的2.1 h降为1.2 h;金属离子、有机溶剂和抑制剂Thr+Met、Lys+Met、Thr+Lys+Met对突变株AK均表现出激活作用.结论 突变体天冬氨酸激酶P184M的酶动力学性质和酶学性质改变显著,为构建高产蛋氨酸菌株提供了一定的参考依据.
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