【摘 要】
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目的:构建、表达、纯化抗血管内皮生长因子(VEGF)的Fab片段(眼明,Vasculizumab),并检测其抗VEGF的活性。方法:首先对轻链(LC)及重链(HC)基因进行密码子优化并做了全基因合成,
【基金项目】
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本文为2011年江苏省科技支撑计划社发项目（No.BE2011666）及2012年江苏省自然科学基金项目（No.BK2012161）
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目的:构建、表达、纯化抗血管内皮生长因子(VEGF)的Fab片段(眼明,Vasculizumab),并检测其抗VEGF的活性。方法:首先对轻链(LC)及重链(HC)基因进行密码子优化并做了全基因合成,将补充了OmpA信号肽核苷酸序列的轻链及重链基因分别克隆到表达质粒pET21a中,成功构建共表达质粒pET21a-LC-HC,目的基因测序正确。然后转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导表达,并进行了温度和IPTG诱导浓度的条件优化。结果:确定大肠杆菌周质分泌表达摇瓶发酵最佳条件为:OD600达到0.6~0.8时加入0.1 mmol/L IPTG,18℃诱导18小时。SDS-PAGE检测目的蛋白Fab有表达。结论:表达纯化后的Fab有抗VEGF活性,可为新药筛选提供材料。
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