【摘 要】
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RAPD(Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD)标记是由Williams等于1990年提出的,一种检测DNA多态性的方法,由于该方法中所选用引物的碱基是随机的,所用引物可达成百上千,
【机 构】
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中国农业科学院作物品种资源研究所 北京 100081中国农业大学植物遗传育种系 北京 100094;
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RAPD(Random Amplified Polymorphism DNA,RAPD)标记是由Williams等于1990年提出的,一种检测DNA多态性的方法,由于该方法中所选用引物的碱基是随机的,所用引物可达成百上千,所检测到的是生物体的整个基因组,既能检测有功能的基因编码区,又能检测到重复序列区,用同一套引物可对多个群体或物种进行分析,其所用引物的随机性和其所检测的结果具有更为可靠的统计性和更好的代表性,使RAPD标记在重要基因的标记、定位、系统进化、群体多样性和遗传演化等方面得到了广泛的应用.但RAPD标记具有三个主要缺点,一是RAPD 标记中的一条EB染色的带往往是一种混合标记,是在基因组DNA中扩增位点不一,长度相同或不同的一组片段的混合片段标记;二是RAPD标记在多态性位点的扩增带大多为显性标记, 因此不能区分个体基因型是纯合还是杂合个体;三是该方法的稳定性和重复性较差.解决以上三个问题的方法是将筛选到的RAPD标记进行回收、克隆和纯化,将RAPD标记中的混合片段转化为等位特异性PCR(AS-PCR)、或序列特异扩增区SCAR标记、或将其中的单拷贝序列转化为RFLP标记的一个探针或STS标记(Sequence Taged Site).通过以上三种办法,即能解决RA PD标记混合标记的问题,又能把显性标记转化为共显性的AS-PCR、SCAR、RFLP或STS标记, 同时这些标记的稳定性和重复性都很高,解决了RAPD标记稳定性的问题.rn把RAPD标记转化为其它分子标记的过程中,RAPD片段的克隆是RAPD标记转化中最重要的一步 .目前,如何快速、高效地克隆RAPD片段的方法研究还没有见到报导,为此,我们进行了克隆RAPD片段方法的系统比较研究. rn1 材料与方法rn1.1 供试材料rn
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