【摘 要】
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目的 分析组蛋白去甲基化酶(KDM2B)对卵巢癌细胞骨架排列中的调控作用,并探讨KDM2B作用的可能分子机制.方法 以人卵巢癌细胞系HO8910为研究模型,采用慢病毒pLKO.1-puro-shRNA表达系统建立KDM2B稳定敲减细胞系(KDM2B敲减组);采用KDM2B慢病毒质粒包装慢病毒,并感染上述人卵巢癌细胞,建立KDM2B过表达细胞系(KDM2B过表达组),以感染慢病毒空载组的HO8910细胞作为对照组.RT-qPCR和western blot检测各组KDM2B mRNA及蛋白质的表达水平;F-a
【机 构】
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南京医科大学姑苏学院&南京医科大学附属苏州医院&苏州市立医院北区检验科,江苏苏州215008
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目的 分析组蛋白去甲基化酶(KDM2B)对卵巢癌细胞骨架排列中的调控作用,并探讨KDM2B作用的可能分子机制.方法 以人卵巢癌细胞系HO8910为研究模型,采用慢病毒pLKO.1-puro-shRNA表达系统建立KDM2B稳定敲减细胞系(KDM2B敲减组);采用KDM2B慢病毒质粒包装慢病毒,并感染上述人卵巢癌细胞,建立KDM2B过表达细胞系(KDM2B过表达组),以感染慢病毒空载组的HO8910细胞作为对照组.RT-qPCR和western blot检测各组KDM2B mRNA及蛋白质的表达水平;F-actin荧光染色法检测卵巢癌细胞骨架排列变化;对照组及KDM2B敲减组进行转录组测序分析;RT-qPCR检测黏着斑激酶(FAK)通路上游基因ITGB1、ITGA6 mRNA的表达水平;免疫荧光染色试验检测FAK蛋白的表达水平;使用GEPIA肿瘤数据库分析FAK在卵巢癌组织样本中的表达水平,并分析FAK与KDM2B的相关性.结果 RT-qPCR结果证实,与对照组相比,KDM2B敲减组KDM2B mRNA水平降低,KDM2B过表达组KDM2B mRNA水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);western blot结果表明,与对照组相比,KDM2B敲减组KDM2B蛋白水平下降,KDM2B过表达组KDM2B蛋白水平上升,差异具有统计学意义(P<0.05).F-actin荧光染色法结果证实,与对照组相比,KDM2B过表达组F-actin的表达量增加,排列显示相同且规则的方向,而KDM2B敲减组F-actin的表达量降低,且排列无序.转录组测序结果表明,KDM2B调控FAK信号通路.GEPIA肿瘤数据库分析结果显示,FAK在卵巢癌组织中的表达升高,且与KDM2B呈正相关(r=0.37,P<0.01).结论 KDM2B促进F-actin的表达,使卵巢癌细胞骨架排列更加规则有序,其作用机制与FAK通路激活有关.
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