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摘 要 目的：研究β-防御素2在溃疡性结肠炎中的表达及其与病情严重程度的相关性，探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎的诊断及严重程度判断中的临床意义。方法：应用免疫组织化学的方法检测60例溃疡性结肠炎黏膜组织标本，并根据病情严重程度分为3组，轻度26例、中度20例、重度14例，以及15例正常结肠黏膜组织标本中β-防御素2的表达。结果：①正常结肠黏膜组织标本中β-防御素2表达较弱。②β-防御素2在轻、中、重度溃疡性结肠炎黏膜组织中的阳性表达率分别为38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14)，并随病情严重程度增高而增高(P＜0.05)。结论：β-防御素2在溃疡性结肠炎中具有重要的意义。
关键词 溃疡性结肠炎 β-防御素2 免疫组织化学
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.06.190
Abstract Objective:to study the beta defense element in the expression and ulcerative colitis and in serious condition degree of correlation,this paper discusses the beta defense element in the diagnosis of ulcerative colitis and severity judge the clinical significance.Immunohistochemical method of detection.Methods:60 patients with ulcerative colitis mucosal tissue samples,and according to the illness severity is divided into three groups,26 patients with mild,moderate,and severe 20 cases in 14 cases,and 15 cases of normal colonic mucosal tissue samples in beta defense element 2 expression.Results:①the normal colonic mucosa tissue samples in beta defense element 2 expression are relatively weak.②beta defense element in light,medium,and severe ulcerative colitis mucosal tissue of positive expression rate were 38.46% (10/26),75.00% (15/20) and 92.85% (13/14),and with the illness severity and heighten increased(P＜0.05).Conclusion:beta defense element in ulcerative colitis is of great importance.
Key Words Ulcerative colitis;Beta defense element 2;Immunohistochemical
溃疡性结肠炎是一种非特异性结肠炎症，其发病可能与环境、遗传、感染、免疫、精神及过敏等因素有关［1］，近年来其发病率明显上升，已引起国内外广泛关注。故从分子生物学角度探讨其发病机制及进展程度已经成为国内外近年来研究的热点及重点问题，为临床工作者提供一个诊断及评估其严重程度的参考。防御素是一种广泛存在于动、植物体内具有广谱抗菌活性的内源性小分子多肽［2］。防御素在肠道上皮细胞屏障中起重要的保护作用。β-防御素2是最早发现的呈诱导型表达的防御素，在炎症组织中大量表达，起到防御保护作用［3］。本文通过免疫组织化学的方法，比较β-防御素2在溃疡性结肠炎病变黏膜组织中和正常结肠黏膜组织中的表达，并分析溃疡性结肠炎不同病情轻重与β-防御素2的表达关系，探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎发病过程中的诊断及严重程度判断的临床意义。
资料与方法
2007年9月～2010年6月内镜室取材及病理证实为溃疡性结肠炎的标本60例。并根据2000年成都全国慢性炎症性肠病学术研讨会制定的诊断标准，分为轻度(26例)、中度(20例)、重度(14例)3组。标本蜡块来源于病理科。患者均有详细的临床资料和内镜检查记录。男女比例1.7:1；年龄18～68岁。15例正常结肠黏膜组织标本为病理证实正常的病例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，3μm厚连续切片。
方法：⑴Envision System免疫组织化学(IH)检测步骤：脱蜡至水后按免疫组化Envision System法操作。一抗兔抗人β-防御素2多克隆抗体；二抗和S-P试剂盒。染色以PBS代替一抗，设立阴性对照。⑵图像采集设备：视野采图及测量采用BI2000高清晰图象处理系统软件。⑶免疫组化染色结果判断：结果判定采用在400倍镜下随机采集10个视野，采用双项积分法行阳性细胞计数：①细胞阳性率：＜5% 0分；5%～25% 1分；26%～50% 2分；51%～75% 3分；＞75% 4分。②染色强度：淡黄色1分；黄或深黄色2分；褐或棕褐色3分。两者计分相乘＞1分为阳性。
统计学处理：统计学处理用SPSS 13.0统计软件进行分析，采用X2检验和Spearman相关分析，检验水准取0.05，P＜0.05认为有统计学意义。
结 果
在正常结肠黏膜组织标本中β-防御素2表达较弱。
β-防御素2在溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达：溃疡性结肠炎黏膜组织中β-防御素2的表达为位于胞核的棕黄色颗粒，在轻、中、重度溃疡性结肠炎黏膜组织中的阳性表达率分别为38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14)，X2=5.284，P=0.022，其差异有统计学意义。见表1。
在轻度溃疡性结肠炎黏膜组织中仅见少数细胞β-防御素2阳性染色，并随恶性程度升高而增加。对研究组溃疡性结肠炎的病情严重程度与β-防御素2阳性表达率应用Spearman相关分析得出：r=0.835，P＜0.05，证实β-防御素2表达率与溃疡性结肠炎的病情严重程度成正相关。见表2。
讨 论
溃疡性结肠炎是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病，目前大多数研究认为与免疫反应异常有关，尤与肠黏膜局部免疫反应的异常关系密切［4］。溃疡性结肠炎是炎症性肠病的一种，多数文献报道溃疡性结肠炎患者体内防御素水平发生了变化，从而推测防御素的异常表达可能是溃疡性结肠炎发病的重要因素之一。本研究旨在探讨防御素与溃疡性结肠炎的关系。
β-防御素2在结肠黏膜组织表达的各种因子中显得较为突出，不仅能抵御外来病原微生物的侵害，防止正常肠道菌群的潜在危害，还能调节炎症反应，并在创伤修复过程中也起到重要作用［5］，是肠道屏障的重要组成部分。β-防御素2在正常状态下表达很少，而在受到炎性刺激时，β-防御素2则大量表达，发挥防御作用。通过研究发现β-防御素2在正常结肠黏膜组织中的表达较弱，均低于病变组的表达，且具有统计学意义，这说明β-防御素2的表达与溃疡性结肠炎的活动有关，这与目前国内外研究一致；本研究还显示，在不同病情严重程度的溃疡性结肠炎黏膜组织中β-防御素2的表达也不尽相同，在轻度溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达明显低于高度溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达，并且随着严重程度的增高而增加，具有统计学意义，这说明溃疡性结肠炎活动性越强，也就是严重程度越大，β-防御素2的表达越高，也就越能保护肠道组织，所以临床上可以通过检测β-防御素2来判断溃疡性结肠炎的严重程度。
综上所述，本研究结果表明β-防御素2参与了溃疡性结肠炎的发生和发展过程，是溃疡性结肠炎发病过程中起保护作用的一个重要参与因素。随着对β-防御素2与溃疡性结肠炎关系研究的不断深入，不仅为临床上诊断溃疡性结肠炎提供了一个依据。而且在治疗上防御素作为一种内源性抗菌肽，是一种理想型的新型药物，可利用基因工程技术大量制备，为溃疡性结肠炎的临床治疗提供新的方向。
参考文献
1 欧阳钦,苗新普.炎症性肠病评估指标的临床应用［J］.中华消化杂志,2009,29(3):209-212.
2 李慕然,姜葵,张庆瑜.溃疡性结肠炎患者结肠勃膜HBD-2和NF-KB及IL28的表达［J］.国际消化病杂志,2008,28(4):340-343.
3 吴小平,欧阳春晖.防御素与炎症性肠病［J］.世界华人消化杂志,2008,16(8):3204-3207.
4 常玉英,欧阳钦.溃疡性结肠炎勃膜中β防御素2与肿瘤坏死因子和白细胞介素印的表达及相互关系［J］.中华消化杂志,2008,47(1):11-14.
5 Herng-Ching Lin,Ching-Che Jason Chiu,Shu-Fen Chen,et al.Ulcerative Colitis and Pregnancy Outcomes in an Asian PopulationUlcerative Colitis and Pregnancy Outcomes［J］.The American Journal of Gastroenterology,2010,105:387-394.
关键词 溃疡性结肠炎 β-防御素2 免疫组织化学
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.06.190
Abstract Objective:to study the beta defense element in the expression and ulcerative colitis and in serious condition degree of correlation,this paper discusses the beta defense element in the diagnosis of ulcerative colitis and severity judge the clinical significance.Immunohistochemical method of detection.Methods:60 patients with ulcerative colitis mucosal tissue samples,and according to the illness severity is divided into three groups,26 patients with mild,moderate,and severe 20 cases in 14 cases,and 15 cases of normal colonic mucosal tissue samples in beta defense element 2 expression.Results:①the normal colonic mucosa tissue samples in beta defense element 2 expression are relatively weak.②beta defense element in light,medium,and severe ulcerative colitis mucosal tissue of positive expression rate were 38.46% (10/26),75.00% (15/20) and 92.85% (13/14),and with the illness severity and heighten increased(P＜0.05).Conclusion:beta defense element in ulcerative colitis is of great importance.
Key Words Ulcerative colitis;Beta defense element 2;Immunohistochemical
溃疡性结肠炎是一种非特异性结肠炎症，其发病可能与环境、遗传、感染、免疫、精神及过敏等因素有关［1］，近年来其发病率明显上升，已引起国内外广泛关注。故从分子生物学角度探讨其发病机制及进展程度已经成为国内外近年来研究的热点及重点问题，为临床工作者提供一个诊断及评估其严重程度的参考。防御素是一种广泛存在于动、植物体内具有广谱抗菌活性的内源性小分子多肽［2］。防御素在肠道上皮细胞屏障中起重要的保护作用。β-防御素2是最早发现的呈诱导型表达的防御素，在炎症组织中大量表达，起到防御保护作用［3］。本文通过免疫组织化学的方法，比较β-防御素2在溃疡性结肠炎病变黏膜组织中和正常结肠黏膜组织中的表达，并分析溃疡性结肠炎不同病情轻重与β-防御素2的表达关系，探讨β-防御素2在溃疡性结肠炎发病过程中的诊断及严重程度判断的临床意义。
资料与方法
2007年9月～2010年6月内镜室取材及病理证实为溃疡性结肠炎的标本60例。并根据2000年成都全国慢性炎症性肠病学术研讨会制定的诊断标准，分为轻度(26例)、中度(20例)、重度(14例)3组。标本蜡块来源于病理科。患者均有详细的临床资料和内镜检查记录。男女比例1.7:1；年龄18～68岁。15例正常结肠黏膜组织标本为病理证实正常的病例。所有标本均经10%福尔马林固定，石蜡包埋，3μm厚连续切片。
方法：⑴Envision System免疫组织化学(IH)检测步骤：脱蜡至水后按免疫组化Envision System法操作。一抗兔抗人β-防御素2多克隆抗体；二抗和S-P试剂盒。染色以PBS代替一抗，设立阴性对照。⑵图像采集设备：视野采图及测量采用BI2000高清晰图象处理系统软件。⑶免疫组化染色结果判断：结果判定采用在400倍镜下随机采集10个视野，采用双项积分法行阳性细胞计数：①细胞阳性率：＜5% 0分；5%～25% 1分；26%～50% 2分；51%～75% 3分；＞75% 4分。②染色强度：淡黄色1分；黄或深黄色2分；褐或棕褐色3分。两者计分相乘＞1分为阳性。
统计学处理：统计学处理用SPSS 13.0统计软件进行分析，采用X2检验和Spearman相关分析，检验水准取0.05，P＜0.05认为有统计学意义。
结 果
在正常结肠黏膜组织标本中β-防御素2表达较弱。
β-防御素2在溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达：溃疡性结肠炎黏膜组织中β-防御素2的表达为位于胞核的棕黄色颗粒，在轻、中、重度溃疡性结肠炎黏膜组织中的阳性表达率分别为38.46%(10/26)、75.00%(15/20)及92.85%(13/14)，X2=5.284，P=0.022，其差异有统计学意义。见表1。
在轻度溃疡性结肠炎黏膜组织中仅见少数细胞β-防御素2阳性染色，并随恶性程度升高而增加。对研究组溃疡性结肠炎的病情严重程度与β-防御素2阳性表达率应用Spearman相关分析得出：r=0.835，P＜0.05，证实β-防御素2表达率与溃疡性结肠炎的病情严重程度成正相关。见表2。
讨 论
溃疡性结肠炎是一组病因不明的慢性肠道炎症性疾病，目前大多数研究认为与免疫反应异常有关，尤与肠黏膜局部免疫反应的异常关系密切［4］。溃疡性结肠炎是炎症性肠病的一种，多数文献报道溃疡性结肠炎患者体内防御素水平发生了变化，从而推测防御素的异常表达可能是溃疡性结肠炎发病的重要因素之一。本研究旨在探讨防御素与溃疡性结肠炎的关系。
β-防御素2在结肠黏膜组织表达的各种因子中显得较为突出，不仅能抵御外来病原微生物的侵害，防止正常肠道菌群的潜在危害，还能调节炎症反应，并在创伤修复过程中也起到重要作用［5］，是肠道屏障的重要组成部分。β-防御素2在正常状态下表达很少，而在受到炎性刺激时，β-防御素2则大量表达，发挥防御作用。通过研究发现β-防御素2在正常结肠黏膜组织中的表达较弱，均低于病变组的表达，且具有统计学意义，这说明β-防御素2的表达与溃疡性结肠炎的活动有关，这与目前国内外研究一致；本研究还显示，在不同病情严重程度的溃疡性结肠炎黏膜组织中β-防御素2的表达也不尽相同，在轻度溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达明显低于高度溃疡性结肠炎黏膜组织中的表达，并且随着严重程度的增高而增加，具有统计学意义，这说明溃疡性结肠炎活动性越强，也就是严重程度越大，β-防御素2的表达越高，也就越能保护肠道组织，所以临床上可以通过检测β-防御素2来判断溃疡性结肠炎的严重程度。
综上所述，本研究结果表明β-防御素2参与了溃疡性结肠炎的发生和发展过程，是溃疡性结肠炎发病过程中起保护作用的一个重要参与因素。随着对β-防御素2与溃疡性结肠炎关系研究的不断深入，不仅为临床上诊断溃疡性结肠炎提供了一个依据。而且在治疗上防御素作为一种内源性抗菌肽，是一种理想型的新型药物，可利用基因工程技术大量制备，为溃疡性结肠炎的临床治疗提供新的方向。
参考文献
1 欧阳钦,苗新普.炎症性肠病评估指标的临床应用［J］.中华消化杂志,2009,29(3):209-212.
2 李慕然,姜葵,张庆瑜.溃疡性结肠炎患者结肠勃膜HBD-2和NF-KB及IL28的表达［J］.国际消化病杂志,2008,28(4):340-343.
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4 常玉英,欧阳钦.溃疡性结肠炎勃膜中β防御素2与肿瘤坏死因子和白细胞介素印的表达及相互关系［J］.中华消化杂志,2008,47(1):11-14.
5 Herng-Ching Lin,Ching-Che Jason Chiu,Shu-Fen Chen,et al.Ulcerative Colitis and Pregnancy Outcomes in an Asian PopulationUlcerative Colitis and Pregnancy Outcomes［J］.The American Journal of Gastroenterology,2010,105:387-394.