【摘 要】
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试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1860、2547bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IP
【机 构】
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湖北省农业科学院畜牧兽医研究所/动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室,华中农业大学农业微生物学国家重点实验室
【基金项目】
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国家重点研发计划(编号:2016YFD0500906),国家自然科学基金(编号:31502069、31170160),湖北省农业科学院青年科学基金(编号:2015NKYJJ14),湖北省农业科学院竞争性计划项目(编号:2016jzxjh030),湖北省农业科技创新中心资助项目(编号:2015-620-004-001).
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试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT,通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1860、2547bp处的A突变为G,使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化,纯化的目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原,免疫新西兰大白兔制备LppT蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得1条特异性蛋白条带,分子质量约为110ku,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以可溶形式表达于上清中,纯化的蛋白经SD
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