目的 探讨人谷氨酸脱羧酶65(GAD65) DNA疫苗预防非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病的作用机制.方法 (1)62只4周龄NOD雌鼠分为PBS(21只) 、PcDNA(20只)、GAD65(21只)3组,由胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3.1、人GAD65 DNA疫苗50 μg,1周后重复1次.观察30周龄的累积糖尿病发病率.(2)各组取12周龄未发病NOD鼠(n=10)胰腺HE染色观察胰岛炎;并用末端脱氧核糖核酸缺口标记法(TUNEL)加SABC法检测胰岛β细胞凋亡;ELISA法测定血清、脾细胞培养上清干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)水平; RT-PCR半定量检测脾脏IL-4、IFN-γ和核因子NF-ATc、NF-ATp mRNA表达水平.结果 (1)30周龄时,PBS 、PcDNA、GAD65组发病率分别为95.2%、80.0%、61.9%.GAD65组发病率低于PBS组(P=0.008).(2)12周龄时GAD65组胰岛炎积分(0.99±0.71)和胰岛β细胞凋亡率(0.75%)均低于PBS组(2.16±0.78,P=0.001;8.97%,P=0.014)和PcDNA组(1.72±0.59, P=0.027;2.65%,P=0.023).GAD65组脾脏NF-ATc、IL-4 mRNA相对吸光度值及血清IL-4水平分别为1.93±0.34、0.70±0.16、36 pg/ml±8 pg/ml,显著高于PBS组(0.79±0.15、0.49±0.11、19 pg/ml±4 pg/ml,P均<0.05)和PcDNA组(1.19±0.56、0.51±0.15、26.9 pg/ml±10.7 pg/ml, P均<0.05);而NF-ATp mRNA表达水平(0.49±0.15)则低于PBS组(0.63±0.17, P<0.05).结论人GAD65 DNA疫苗通过上调NF-ATc、IL-4和下调NF-ATp,从而使免疫平衡向Th2偏移,致使NOD鼠胰岛炎减轻,胰岛β细胞凋亡减少而预防糖尿病发生。