负电荷区Glu224-Glu225-Asp226对精氨酸激酶结构和功能的影响

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精氨酸激酶224-226氨基酸残基是高度保守的负电荷区域,其在激酶家族的地位一直是学术界关注的问题之一.将刀额新对虾精氨酸激酶高度保守的负电荷密集区氨基酸残基Glu224-Glu225-Asp226突变为Gly224-Gly225-Gly226,消除负电荷性质.突变体在Rosetta中实现了可溶性表达,用His-tag亲和层析纯化了蛋白.采用酶括力测定及光谱学分析等手段的研究结果表明,该“负电荷区”对酶的结构与功能有着重要的影响.
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