【摘 要】
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利用PCR扩增基因cryID启动子及上游区片段,在测序的基础上构建含cryID-lacZ融合基因穿梭质粒,导入不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中,并以crylA6-lacZ融合基因为对照测定β
【机 构】
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华中农业大学农业部农业微生物重点实验室微生物农药国家工程研究中心,武汉,430070塔里木农垦大学植物科学技术学院,阿拉尔,843300;美国Purdue 大学生物系 IN47906;华中农业大学农业
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利用PCR扩增基因cryID启动子及上游区片段,在测序的基础上构建含cryID-lacZ融合基因穿梭质粒,导入不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中,并以crylA6-lacZ融合基因为对照测定β-半乳糖苷酶活性,检测启动子上游区的作用.结果表明,cry1D-lacZ和crylAb-lacZ融合基因在不同遗传背景的菌株中表达完全不同,也许一些宿主专一性的因子参与了转录调控;而在同一菌株中CcryID-lacZ和crylAb-lacZ的表达差异是由于上游区的不同以及竞争有限的σ因子所致.利用PCR定点诱变技术突变其SD序列GGGGA为GGAGG后,crylD-lacZ融合基因的表达提高了1.0～1.6倍.表明GGAGG是苏云金芽胞杆菌合适的SD序列,也揭示了不合适的SD序列是cwID表达量低的原因之一.
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