背景 角膜缘干细胞功能缺乏(LSCD)时不仅损伤了角膜缘干细胞(LSCs),其基质微环境也被破坏,治疗LSCD应包括补充LSCs和恢复微环境两个方面.目前改善LSCD者微环境的方法尚少,迫切需要建立更适合LSCs体外生长的微环境. 目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)能否成为修复角膜缘微环境的理想细胞,及其作为饲养细胞在人LSCs体外扩增过程中改善微环境的可能机制. 方法 体外培养人BMSCs并传3代,用流式细胞仪检测培养细胞的表面抗原CD45、CD71、CD90、CD105和HLA-DR的表达,并将其定向诱导分化为成骨细胞和脂肪细胞.将人BMSCs经丝裂霉素C(MMC)作用后成为饲养细胞.用供体人角膜缘组织分离培养LSCs,分别与BMSCs饲养细胞(BMSCs饲养组)、Swiss-3T3成纤维细胞饲养细胞(Swiss-3T3饲养组)共培养或单独培养(无饲养细胞组),比较3个组LSCs的集落生成率(CFE).将BMSCs饲养组的LSCs继续进行培养,用流式细胞仪对培养的细胞进行鉴定.逆转录PCR(RT-PCR)法分析人BMSCs中相关细胞因子的表达,以评估其改善角膜缘基质微环境的可能机制. 结果 体外培养的BMSCs均质性好,间质细胞标志物CD71、CD90、CD105在获得的BMSCs上均呈高表达,而造血细胞标志物CD45和HLA-DR抗原均呈低表达.共培养12d后,BMSCs饲养组、Swiss-3T3饲养组以及无饲养细胞组LSCs的CFE分别为3.67％±0.58％、4.30％±1.54％、0.20％±0.10％,3个组间总体差异有统计学意义(F=15.420,P=0.040)；BMSCs饲养组与Swiss-3T3饲养组的CFE差异无统计学意义(P=0.456).BMSCs饲养组与无饲养细胞组间、Swiss-3T3饲养组与无饲养细胞组间CFE的差异均有统计学意义(P=0.005、0.002).经流式细胞学检测,BMSCs饲养组LSCs的ABCG2抗原阳性.RT-PCR反应后琼脂糖凝胶电泳结果显示,碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、干细胞因子(SCF)、N-钙黏连蛋白(N-cad)在BMSCs中呈阳性表达.结论 人BMSCs能够改善LSCs生长的基质微环境,提高其增生能力,是LSCs体外培养饲养细胞的理想来源。