【摘 要】
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目的:制备硫酸化支链淀粉(SA),研究其对核转录因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7巨噬细胞分化为破骨细胞的影响及其分子作用机制.方法:采用氯磺酸-吡啶法制备SA,并
【机 构】
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上海中医药大学,上海,201203;中国科学院上海药物研究所,上海,201203
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目的:制备硫酸化支链淀粉(SA),研究其对核转录因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7巨噬细胞分化为破骨细胞的影响及其分子作用机制.方法:采用氯磺酸-吡啶法制备SA,并用红外光谱与13C-NMR波谱检测硫酸基团的取代位置,用氯化钡-明矾浊度法测定硫酸化取代度.利用MTT法检测细胞毒性;同时用抗酒石酸酸性磷酸酯酶(TRAP)染色法,结合RT-PCR检测破骨细胞标志性基因TRAP及组织蛋白酶K(cathepsin K)的表达,研究SA对RANKL诱导RAW264.7分化为破骨细胞的影响.利用蛋白免疫印迹法检测SA对RANKL诱导激活MAPK相关信号通路(ERK)及NF-κB信号通路(IκBα)的影响.结果:制备获得一种硫酸化支链淀粉,其硫酸基取代度为1.07,取代位置主要发生在C-6位.在对细胞增殖没有明显影响的浓度范围内(≤20 μg· mL-1),SA能够浓度依赖性地抑制RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞.同时RANKL诱导的ERK磷酸化及IκBα降解被SA所抑制.结论:研究制备的硫酸化支链淀粉能够部分通过阻断MAPK(ERK)信号通路及NF-κB信号通路(IκBα)抑制RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞.
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