利用CRISPR/Cas9技术构建GLRX3基因敲除的HEK293细胞系

来源 :陕西师范大学学报（自然科学版） | 被引量 : 0次 | 上传用户：dawulitao

【摘要】

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为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性.将携带Cas9及靶向h

【作者】

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代鑫赵俊丽杨沛艳夏海滨

【机构】

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陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710119

【出处】

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陕西师范大学学报（自然科学版）

【发表日期】

：

2017年1期

【关键词】

：

GLRX3 CRISPR/Cas9系统基因敲除基因编辑

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为了构建GLRX3(Glutaredoxin 3)敲除的HEK293细胞系,根据该蛋白结构特性设计了靶向于GLRX3基因Exon5的4个sgRNA,并通过T7E1检测确认了所设计sgRNA的有效性.将携带Cas9及靶向hGLRX3-Exon5的sgRNA1的打靶载体转染HEK293,通过药物Puromycin和细胞克隆化筛选出稳定GLRX3基因敲除的HEK293细胞株,并通过测序确定GLRX3两个等位基因均发生移码突变.通过免疫印迹在蛋白表达水平确认了该基因的敲除.利用CRISPR/Cas9技术成功构建了GLRX3敲除的HEK293细胞株,其为探索GLRX3的功能和作用机制提供了有效的细胞模型.

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