【摘 要】
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目的 探究miRNA?26b?5p(miR?26b?5p)靶向调控NFE2L3表达水平影响结直肠癌细胞生长、迁移和侵袭能力的分子机制.方法 通过qPCR的方法检测了人正常肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞系(HT29、SW620及HCT116)中miR?26b?5p的表达水平.通过qPCR及western blot检测了上述细胞系中NFE2L3的表达水平.生物信息学方法分析了miRNA?26b?5p与NFE2L3结合的靶向序列.双荧光素酶基因报告实验检测miR?26b?5p对NFE2L3的靶向调控机
【机 构】
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广州市红十字会医院普外科 广州510220;广州市妇女儿童医疗中心消化内科 广州510623
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目的 探究miRNA?26b?5p(miR?26b?5p)靶向调控NFE2L3表达水平影响结直肠癌细胞生长、迁移和侵袭能力的分子机制.方法 通过qPCR的方法检测了人正常肠上皮细胞(NCM460)及结直肠癌细胞系(HT29、SW620及HCT116)中miR?26b?5p的表达水平.通过qPCR及western blot检测了上述细胞系中NFE2L3的表达水平.生物信息学方法分析了miRNA?26b?5p与NFE2L3结合的靶向序列.双荧光素酶基因报告实验检测miR?26b?5p对NFE2L3的靶向调控机制.用脂质体法将miR?26b?5p mimic或同时将NFE2L3转染HT29及SW620结直肠癌细胞系中,通过CCK?8及克隆形成实验观察对细胞生长的影响,通过流式细胞术观察凋亡能力的影响,通过Transwell观察细胞迁移和侵袭能力的影响.结果 与人正常上皮细胞系相比,在结直肠癌细胞系中miR?26b?5p的表达水平显著下调(P<0.05),而NEF2L3的mRNA水平及蛋白水平则显著上调(P<0.05).双荧光素酶报道基因实验显示miR?26b?5p能显著影响NEF2L33′UTR表达载体的荧光素酶活性(P<0.05).过表达miR?26b?5p可显著抑制结直肠癌细胞系细胞的生长、克隆形成及迁移和侵袭能力,引起细胞凋亡(均P<0.05),而同时过表达NEF2L3则可抵消miR?26b?5p的对细胞功能的作用(均P<0.05).结论 在结直肠癌中miR?26b?5p低表达,而NEF2L3高表达;miR?26b?5p可靶向调控癌基因EF2L3的表达水平,从而调控结直肠癌细胞的生长、凋亡、迁移和侵袭,参与结直肠癌的发生发展.
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