【摘 要】
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目的:原核表达并分离纯化人细胞骨架调节蛋白基因Nelin.方法:利用DNAstar软件预测Nelin的B细胞表位,选择Nelin基因B细胞表位较多、特异性最强的片段.用DNA重组技术,将此片段
【机 构】
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中国医学科学院,中国协和医科大学,阜外心血管病医院分子医学中心,北京,100037;延边大学医学院生物化学与分子生物学教研室,延吉,133000
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目的:原核表达并分离纯化人细胞骨架调节蛋白基因Nelin.方法:利用DNAstar软件预测Nelin的B细胞表位,选择Nelin基因B细胞表位较多、特异性最强的片段.用DNA重组技术,将此片段插入原核表达载体pET28a(+),构建C末端带有His6标签的原核表达载体pET28a-Nelin,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,产物用Ni2+金属螯合吸附层析柱纯化.结果:成功构建了pET28a-Nelin表达载体,IPTG诱导后表达分子量约为17 000的可溶性蛋白,Nelin-His6蛋白的表达量占菌体总蛋白的18%,经Ni2+金属螯合层析柱纯化,得到了电泳纯的Nelin-His6蛋白.结论:建立了稳定的Nelin基因的表达体系,为其功能研究奠定了基础.
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