【摘 要】
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目的 观察六味地黄汤含药血清对CoCl2缺氧后HK-2细胞中的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的影响.方法 体外培养HK-2细胞,分为3组:正常组(10％空白血清)、模型组(10％空白血清+200μmol·L-1 CoCl2)、含药血清组(10％含药血清+200μmol·L-1 CoCl2).CCK-8法检测不同浓度空白血清、
【机 构】
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湖南中医药大学医学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学第一附属医院,湖南 长沙 410007;湖南省脑科医院,湖南 长沙 410021
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目的 观察六味地黄汤含药血清对CoCl2缺氧后HK-2细胞中的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的影响.方法 体外培养HK-2细胞,分为3组:正常组(10％空白血清)、模型组(10％空白血清+200μmol·L-1 CoCl2)、含药血清组(10％含药血清+200μmol·L-1 CoCl2).CCK-8法检测不同浓度空白血清、含药血清(2.5％、5％、10％、20％、40％)在24、36 h对HK-2细胞存活率的影响;以及不同浓度CoCl2(150、200、300、600μmol·L-1)在24 h的最佳干预浓度.qRT-PCR法和Western blot法分别检测各组E-cadherin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平;免疫荧光观察各组E-cadherin、α-SMA蛋白表达情况.结果 CCK-8法确定含药血清和空白血清的最佳干预浓度和干预时间分别为10％和24 h;CoCl2的最佳干预浓度为200μmol·L-1.与正常组比较,模型组E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01)、α-SMA明显升高(P<0.05);与模型组比较,含药血清组E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)、α-SMA明显降低(P<0.01).结论 缺氧能诱导HK-2细胞发生EMT,六味地黄汤含药血清能够降低α-SMA的表达,升高E-cadherin的表达,从而缓解肾小管EMT.
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