【摘 要】
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本试验旨在构建并获得共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs).扩增PCV2 Cap及PCV3 Cap基因,将其克隆至pEASY-Blunt载体,分别命名为pEPC2、pEPC3,验证正确后将目的基因分别连接至杆状病毒双启动子表达载体pFastBaC-Dual,获得含有PCV2、PCV3 Cap基因的重组杆状病毒质粒pFBD-PC2-PC3.将该重组质粒转化至大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞,进行蓝白斑筛选与PCR鉴定,获得重组杆粒Bacm
【机 构】
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吉林大学动物科学学院,吉林长春130062;中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单元,中国农业科学院长春兽医研究所,吉林长春130122;中国医学科学院人兽共患病毒病防控关键技术研究创新单
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本试验旨在构建并获得共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs).扩增PCV2 Cap及PCV3 Cap基因,将其克隆至pEASY-Blunt载体,分别命名为pEPC2、pEPC3,验证正确后将目的基因分别连接至杆状病毒双启动子表达载体pFastBaC-Dual,获得含有PCV2、PCV3 Cap基因的重组杆状病毒质粒pFBD-PC2-PC3.将该重组质粒转化至大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞,进行蓝白斑筛选与PCR鉴定,获得重组杆粒Bacmid-PC2-PC3.利用脂质体将Bacmid-PC2-PC3转染至SF9细胞进行病毒拯救,转染后72 h收取上清病毒液,并盲传3代.用其感染Sf9细胞,通过间接免疫荧光及Western blot验证目的蛋白是否表达;同时收集感染后的Sf9细胞上清,在电镜下观察是否形成VLPs.结果显示,成功构建了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的重组质粒,并获得重组杆粒,拯救出重组杆状病毒.病毒感染Sf9细胞后,目的蛋白获得表达且具有反应原性,能够形成VLPs.本研究成功制备了共表达PCV2/PCV3 Cap蛋白的VLPs,为深入开展猪圆环病毒二价新型疫苗研发奠定了坚实基础.
其他文献
[目的]探明优化栽培模式对水稻根冠发育以及产量与肥水利用效率的影响.[方法]以甬优1540(三系籼/粳杂交稻)为材料,设置3个处理:0N(空白)栽培模式、当地农户习惯栽培模式(对照)以及优化栽培模式.[结果]优化栽培处理两年的平均产量为11.5 t/hm2,与对照差异不显著;但其氮肥偏生产力、产谷利用率以及水分利用率较对照显著提高.与对照相比,优化栽培处理改善了水稻根系形态与生理特征,降低了根系生物量与根-冠比,提高了深根比与比根长,增加了齐穗期与灌浆中期根系活跃吸收表面积,提高了灌浆中后期根系氧化力与根
[目的]随着全球气候变暖的加剧,灌浆期高温逼熟对水稻产量和品质的威胁日趋严重,明确水稻不同耐热性品种对灌浆期高温逼熟的反应及其与气象因子间的关系,对提高优质稻栽培和育种水平意义重大.[方法]对48个不同类型的水稻品种分4期进行大田播种,使各品种在灌浆期经历不同气象条件,探讨其主要产量、品质性状表现及其与气象因子的关系.[结果]多数品种粒重和品质指标在播期间差异显著;根据各指标变异系数和指标间相关性,确定千粒重、整精米率和垩白度等作为水稻品种灌浆期响应气象条件的主要农艺学指标;而气象因子中,日平均温度、相对
[目的]水稻粒形为多基因控制的复杂数量性状,同时影响稻谷产量和稻米外观及碾磨品质,挖掘粒形相关基因并解析其遗传机制,对于水稻高产和优质品种选育具有重要意义.[方法]以前期利用大粒籼稻品种特大籼(TDX)为供体亲本、小粒粳稻品种日本晴(Nipponbare,NPB)为轮回亲本获得的一个大粒近等基因系,在水稻第2染色体上初定位粒形调控基因GS2.2(grain size 2.2)的基础上,对GS2.2基因进行了精细定位和候选功能基因的克隆鉴定.[结果]利用BC4F2群体中2887份极小粒单株及该群体中70份基
[目的]氮素的吸收利用决定着水稻物质积累和产量的形成.随着农村劳动力的减少,机插稻迅速发展,但针对机插稻育秧环节与插秧机具融合对机插稻氮素吸收利用特征影响的研究较少.以机插稻农机农艺首要融合点“育秧-机插”关键环节为研究对象,探究育秧方式配合不同插秧机具对机插稻氮素吸收利用的影响.[方法]以杂交籼稻F优498为试验材料,采用三因素随机区组试验,设置2种育秧方式:营养土育秧和稀泥育秧;3个播种量:65 g/盘,85 g/盘,105 g/盘;2种插秧机具:4行手扶式插秧机,6行乘坐式高速插秧机.[结果]育秧方
[目的]通过对水稻剑叶性状的综合评价,明确剑叶相关性状间及与6个农艺性状的关系.检测剑叶相关性状的QTL,为优良株型品种选育,剑叶性状基因的精细定位和克隆奠定基础.[方法]以日本优质粳稻品种越光和葡萄牙粳稻地方种Bertone构建的回交群体两个世代为实验材料,利用BC3F1群体基因型构建遗传连锁图谱;测定亲本和BC3F2群体各株系剑叶SPAD、剑叶长、剑叶宽,计算剑叶长宽比、剑叶面积;利用隶属函数和标准差系数赋予权重法获得剑叶性状综合评价值(D值),分析其与6个农艺性状间的关系.分别利用单标记分析(SPA
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[目的]利用转录组测序技术,探究水稻萌发过程中激素信号转导和细胞内部氧化还原平衡的调控机理,以期增加对萌发过程中复杂调控机制的理解,促进萌发期基因组转录调控网络的构建,并挖掘调控种子萌发的相关基因,为水稻直播稻新品种选育提供理论参考.[方法]利用萌发0、24和48 h的种子进行动态转录组测序分析,以差异倍数≥2、错误发现率≤0.05为阈值筛选差异基因,并利用Gene Ontology(GO)和KEGG Pathway数据库对萌发不同阶段的差异基因进行分析注释;同时利用实时荧光定量PCR对测序结果进行验证;
摘 要：山西是我国典型的资源型大省，是我国重要的能源和原材料供应基地，长期以来为国家能源供应和现代化建设作出了突出贡献。阳泉市是全国最大的无烟煤生产基地，随着近年来煤炭资源不断被开发，矿产资源日益枯竭，在开采过程形成的人口、资源、环境与经济发展的矛盾突出，如何完成资源型城市的转型跨越发展，实现产业结构的合理升级，走循环经济发展道路，是阳泉市经济发展面临的重要课题。 关键词：资源型城市；转型；阳泉
为探索新城疫病毒(NDV)F基因及其蛋白诱导细胞免疫的能力,本研究对基因Ⅶ型NDV CK/CH/LHLJ/1/06株F基因进行了密码子优化和修饰,将其克隆至真核表达载体,获得了重组质粒pCAF.将质粒pCAF转染至悬浮培养的细胞中,上清中表达的蛋白经纯化获得了重组蛋白proF.以构建的质粒pCAF及其重组蛋白proF作为DNA和亚单位疫苗,采用pCAF单独免疫、proF单独免疫、pCAF和proF联合免疫的方式分别免疫SPF鸡,免疫后分离外周血淋巴细胞,通过淋巴细胞增殖试验和细胞因子检测试验评估pCAF和
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