金黄色葡萄球菌蛋白A Z结构域的原核表达及多克隆抗体的制备

来源 :温州医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qiuzhilv
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:制备金黄色葡萄球菌蛋白A(Sp A)Z结构域的原核表达蛋白及其多克隆抗体,并对其进行特异性鉴定。方法:3段Sp A-Z结构域经柔性肽(GS)串联连接构成三串联体(Sp A-3Z),经原核密码子优化后全基因合成,克隆至p ET21a(+)载体,构建p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western Blot法分析鉴定;纯化的Sp A-3Z重组蛋白免疫日本大耳白兔,并分别于免疫前和免疫后采集血清,用ELISA法检测其多克隆抗体的反应和效价,并用Western Blot法分析多克隆抗体结合天然Sp A的特异性。结果:成功构建了p ET21a(+)/Sp A-3Z重组质粒;该重组质粒在原核表达系统表达并获得纯化的Sp A-3Z重组蛋白,SDS-PAGE电泳显示该蛋白的分子质量约为21 k Da,与理论分子量大小相符;日本大耳白兔经该蛋白免疫后可产生特异性的多克隆血清Ig G抗体,效价可达1:40 000;Western Blot法检测结果显示,在分子质量约42 k Da(天然Sp A蛋白)处出现单一条带,提示兔多克隆血清抗体可识别天然Sp A。结论:Sp A-3Z原核蛋白有较好的免疫原性和抗原性,制备的Sp A-3Z兔多克隆血清抗体Ig G效价高、特异性好,可进一步用于Sp A-Z相关的生物学和免疫学等功能研究。 Objective: To prepare the prokaryotic expression protein and its polyclonal antibody against Staphylococcus aureus protein A (Sp A) Z domain and to identify it. METHODS: Three Sp AZ domains were connected in series by flexible peptide (GS) to form a triple tandem body (Sp A-3Z), which was synthesized by pronucleus codon optimization and cloned into p ET21a (+) vector to construct pET21a +) / Sp A-3Z recombinant plasmid was constructed and sequenced. The recombinant plasmid was transformed into E.coli BL21 (DE3) and recombinant protein was induced by isopropyl thio-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG) Purified by Ni-NTA affinity chromatography and analyzed by SDS-PAGE and Western Blot. Purified Sp A-3Z recombinant protein was immunized with Japanese white rabbits and serum was collected before immunization and after immunization. Method was used to detect the reaction and titer of the polyclonal antibody. The specificity of the polyclonal antibody bound to native Sp A was analyzed by Western Blot. Results: The recombinant plasmid pET21a (+) / Sp A-3Z was successfully constructed. The recombinant plasmid was expressed in prokaryotic expression system and purified the recombinant protein Sp A-3Z. The molecular weight of the recombinant protein was about 21 k Da, consistent with the theoretical molecular size; Japanese white rabbits after immunization of the protein can produce specific polyclonal serum Ig G antibody titers up to 1:40 000; Western Blot test results show that the molecular mass A single band at about 42 kDa (native Sp A protein) suggested that rabbit polyclonal serum antibodies recognize native Sp A. CONCLUSION: Sp A-3Z prokaryotic protein has good immunogenicity and antigenicity. The prepared polyclonal antibody against Sp A-3Z rabbit Ig G has high titer and good specificity and can be further used in Sp AZ biology And immunology and other functional studies.
其他文献
针对生物发酵过程,提出了一种基于证据理论的高斯过程回归多模型软测量方法,其中多模型融合策略同时考虑了数据聚类特性和软测量子模型统计特性。首先,对聚类后的各子类建立高斯
在化工机械装置中,设备腐蚀是一种较为常见的现象。由于化工机械设备的特殊性,比较容易被腐蚀,从而影响其外观和性能,严重的还造成化工机械设备无法使用或者酿成生产事故,使
理论与实际相结合要求理论与实际双向趋近和转化。在基层党建研究工作中,理论与实际“两张皮”的问题比较突出。在基层党建研究过程中做到理论与实际相结合可以从五个方面着手
公共图书馆作为我国公共文化服务体系的重要组成部分,在宗旨、功能和基本理念等方面与乡村振兴战略存在高度的内在契合,能够有效应对"基础建设薄弱""贫困文化蔓延""文化矛盾
为了保证建筑物的稳定性,建筑基础都必须满足地下埋深嵌固的要求。建筑高度越高,其埋置深度也就越深,对基坑工程的要求越来越高。
<正> 本文对1996~2000年全区“世行项目”统计报表中复治涂阳肺结核病人(包括复发涂阳、其他复治涂阳病人)的构成情况和转归指标进行统计分析。结果表明,1996~2000年5年间全区
会议
目的 观察中医药内外兼治强直性脊柱炎髋关节损害的临床效果。方法 选取于2015年7月至2016年7月在三门峡市中医院收治的强直性脊柱炎髋关节损害患者56例,随机分成对照组和观
目的观察熊果酸(UA)诱导B16黑色素瘤细胞的分化作用。方法采用MTT法测定UA对B16细胞增殖抑制作用;并以形态学、黑色素含量、酪氨酸酶活性和体内致瘤能力变化为指标。观测UA对B16
选矿过程的细粒尾矿通常都在尾矿池中进行处置。曾试图用这些细粒尾矿作为充填料,然而至今为止,在大多数的充填操作只有少数细粒尾矿被利用,因此,将尾矿送到尾矿池后面临着处
为了规范农村土地承包经营权确权登记颁证工作,加强管理和有效利用确权登记颁证档案,按照省市档案局、农委关于农村土地确权档案工作的要求,连山区农村土地确权档案工作坚持