反义单核细胞趋化蛋白1对大鼠系膜细胞增生的影响

来源 :中华肾脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liujitao0811
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目的 研究反义单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)对系膜细胞MCP-1分泌及增生的影响.方法 用逆转录病毒感染体外培养的系膜细胞,得到转染反义MCP-1的系膜细胞,经PCR及Southern印迹鉴定外源基因在系膜细胞基因组DNA上的整合.脂多糖(LPS)刺激反义MCP-1系膜细胞,以正常系膜细胞及转染空白载体的系膜细胞为对照,观察其增生情况.用RT-PCR法检测MCP-1、CC趋化因子受体2(CCR2)的mRNA表达.ELISA法检测细胞上清中MCP-1蛋白的分泌.结果 经逆转录病毒转染得到的反义MCP-1的系膜细胞,其基因组DNA中有外源基因的整合.在正常的培养条件下,反义组与对照组系膜细胞的增生差异无统计学意义;MCP-1、CCR2的mRNA均有少量表达;MCP-1的蛋白也有微弱表达.在LPS的刺激下,反义组与对照组MCP-1的mRNA的表达均增高;MCP-1蛋白的分泌均增多.与对照组比较,反义组系膜细胞的增生受抑制[(16.83+1.16)×104/mi比(19.63+1.85)×104/ml],MCP-1的mRNA的表达较少(0.424比0.866,P<0.01),MCP-l蛋白的分泌减少.CCR2的mRNA表达与MCP-1的变化一致.结论 (1)逆转录病毒载体pLXSN可有效地介导MCP-1 cDNA在系膜细胞的转染.(2)反义MCP-1可降低系膜细胞MCP-1的转录和翻译.(3)反义MCP-1的转染可降低系膜细胞在炎症状态时的增生.(4)大鼠系膜细胞具有CCR2的表达,在炎症状态时形成MCP-1、CCR2的自分泌环路。

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